反相高效液相色谱法.ppt

第一页，共十二页，2022年，8月28日 预　备　知　识 与气相色谱法的比较： 流动相：由气相?液相 与经典的液相色谱法的比较： 在经典的液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论，采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化，这种色谱技术称作高效液相色谱法。 分类 分配色谱（partition chromatography） 吸附色谱(adsorption …) 离子交换色谱(ion exchange …) 尺寸排阻色谱(size exclusion …)又称凝胶色谱 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。 第二页，共十二页，2022年，8月28日 实验目的 1. 学习高效液相色谱仪的操作 2. 了解反相液相色谱法分离非极性化合物的基本原理 3. 掌握用反相液相色谱法分离芳香烃类化合物 方法原理 　　　　 　　选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。除了有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。 　　根据使用的固定相及分离原理不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。 　　在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K： 第三页，共十二页，2022年，8月28日 本实验：固定相：ODS-C18，流动相：甲醇－水混合溶液 　　　　分离组分：苯和甲苯的混合溶液 　　流动相为非极性而固定相为极性物质的色谱称正相液相色谱法，以流动相为极性而固定相为非极性的色谱称反相液相色谱法。将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。据此，采用反相液相色谱法可分离烷基苯类化合物。 第四页，共十二页，2022年，8月28日 高效液相色谱仪 第五页，共十二页，2022年，8月28日 DSC000017 HPLC 第六页，共十二页，2022年，8月28日 液相色谱流程图 PUMP Detector W Data station (Recorder) or Collection 第七页，共十二页，2022年，8月28日 高压输液系统 要求：流量稳定 精度在1～2%之间 压力平稳无脉动 往复泵压力有波动，所以柱前设缓冲装置（压力脉 动阻力器） 流速可调 一般分析仪器：1～2mL/min 制备仪器：10～20mL/min 储液瓶 高压泵 （核心） 过滤器 压力脉动阻力器 恒压泵：输出压力恒定，但流速随系统阻力变化 恒流泵：流速恒定，压力随阻力变化 第八页，共十二页，2022年，8月28日 1.注射器进样（隔膜进样） 带压进样 停流进样 2.高压定量进样阀（常用） 图 六通进样阀 泵 柱 进样 排放 泵 排放 进样 柱 进样系统 第九页，共十二页，2022年，8月28日