大叶蛇葡萄蛋白质组双向电泳分析＊.PDF

世界科学技术—中医药现代化绎专题讨论：中药资源与鉴定 大叶蛇葡萄蛋白质组双向电泳分析＊ ＊＊ ， ， ， 黄 静，桂 春，答国政 夏 叶 程佩佩 张秀桥 （湖北中医药大学药学院 武汉 430065） ： ：采用 摘 要 目的：利用双向电泳法研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达。方法 Tris饱和酚提取和醋 酸铵甲醇沉淀大叶蛇葡萄嫩叶中的蛋白质；运用双向电泳法分离蛋白质，并对扫描后的二维凝胶电泳图 ，得到蛋白 ， 谱进行分析 质表征图谱。结果：根据各个样品间蛋白点灰度值的比值差异 选择了差异较大的 7 个蛋白点进行质谱鉴定，鉴定了其中两种蛋白，分别为HypotheticalProtein 和UnnamedProteinProduct。 结论：双向电泳技术的应用为从分子水平研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达奠定了良好的基础。 关键词：大叶蛇葡萄 蛋白质组 蛋白质提取 双向电泳 ： ： doi:10.11842/wst.2014.11.016 中图分类号 R284.1 文献标识码 A 双向电泳技术是目前蛋白质组学[1] 用 、头昏目胀、高血压、 研究的关键 效， 于痢疾、泄泻、小便淋痛 技术，包括蛋白质的提取、等电聚焦 Isoelectrofocus原 高血糖血脂等治疗[9-12]。目前尚未见关于大叶蛇葡 。自 。 ing，IEF）、SDS和凝胶染色等步骤 1975 萄通过双向电泳研究活性成分蛋白表达的报道 本 ，第一向已从 ，建 年P.H.O’Farrell建立该技术以来 载体 文在前期大叶蛇葡萄活性成分研究的基础上 立 （ 了大叶蛇葡萄嫩叶中蛋白质提取、纯化方法，并采 两性电解质 pH梯度 CarrierAmpholytepHGradi原 （ 用双向电泳和 MALDI-TOF-MS 技术[13] ent）等电聚焦发展到固相 pH 梯度 Immobilized pH ，初步对蛋 Gradient，IPG）等电聚焦，使得双向电泳技术的分辨 白差异进行分析，为进一步研究大叶蛇葡萄活性成 [2] 率和重复性得到了很大提高 。 分蛋白表达奠定了一定基础。 第一向运用等电聚焦水平电泳仪通过电荷分 1 材料和方法 离蛋白质，第二向运用 SDS聚丙烯酰胺凝胶 垂直电泳通过质量分离蛋白质[3] ，这一技术在生物 1.1 实验材料 蛋白质研究中得到了广泛的应用，目前已成为分离 大叶蛇葡萄样品（共3 批）分别采集于湖北省 蛋白的有效手段[4-6] [7] 恩施土家族苗族自治州来凤县，经湖北中医药大