适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法.pdf

!# 年 $ 月 !#$ !# 色 谱 !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+12 %#’ !$ (’ % %% ’ % ! 通讯联系人：董文轩，教授，研究方向为果树种质资源与遗传育种 ’ )*#：（!%）%$(%)，+,-./#：01234*)+ (!* ’ 5-’ 基金项目：河北省自然科学基金项目（6!$#*$）’ 收稿日期：!# ,! ,(( 适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法 曾广娟(，! ，, 李春敏! ，, 张新忠) ，, 滕云龙( ，, 董文轩(! （( ’ 沈阳农业大学园艺学院，辽宁 沈阳 (((*(；! ’ 河北省农林科学院昌黎果树研究所，河北 昌黎 ***； ) ’ 中国农业大学园艺植物研究所，北京 ((#)） 摘要：为了探索适用于双向电泳（! ,7+）分析的苹果叶片蛋白质提取方法，比较了三氯乙酸（)68）9 丙酮沉淀法、二 硫苏糖醇（7))）9 丙酮法、):/;,6# 提取法和改良的 ):/;,6# 提 取 法 等 % 种 蛋 白 质 提 取 方 法。以 $ 5-、= ) ’ ( 的线性固相 = 梯度（ /--/#/?*2 = 4:.2/*3@，ABC）胶条作为第一向电泳，以十二烷基硫酸钠 ,聚丙烯酰胺凝胶电 泳（D7D,B8C+）（(!- .E 的分离胶）作为第 二 向 电 泳，对 提 取 物 进 行 ! ,7+ 分 离，采 用 银 染 显 色。结 果 表 明，上 述 % 种方法在 ! ,7+ 图谱上分别得到 (%，!(.，(( 和 *(* 个蛋白质点。其中以改良的 ):/;,6# 提取法得到的蛋白质点 数最多，且背景清晰、图谱上没有明显的横纵 条 纹。为 了 进 一 步 验 证 改 良 的 ):/;,6# 提 取 法 的 有 效 性，用 ( 5-、 = ) ’ ( 的线性 ABC 胶条和 (!- .E 的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质 进 行 ! ,7+ 分 离，考 马 斯 亮 蓝 F,!. 染 色， 共检测到 %.. 个蛋白质点，其相对分子质量主要分布在 (% ’ ** 范围内，图谱背景清晰，再 次 证 明 应 用 该 方 法制备的样品适用于双向电泳分析，可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。 关键词：双向电泳；蛋白质提取方法；苹果叶片；蛋白质组学分析 中图分类号：G*., , 文献标识码：8, , 文章编号：( ,$()（!#）% ,%% ,., , 栏目类别：研究论文 !#$#%’ ()*’%# %+’),$’#* -%’.*/ )*- ,((0% 0%,1%2 *) ,((0% ()*’%*-#$ ,,032#2 42#5 ’6*7/#-%2#*,0 %0%$’)*(.*)%2#2 ,,032#2 H+(C C.34I.3 (，! ，JA 6K3-/3! ，H8(C L/3?K34) ，)+(C M3#34( ，7G(C N*31.3(! （! ! #$$%% #’ (#)*+,-$*-)%，./%0120 3)+,-$*-)2$ 40+5%)6+*1，./%0120 !!!#!，/+02； $ ! /20$+ 706*+*-*% #’ 8#9#$#1，(%:%+ 3,2;%91 #’ 3)+,-$*-)2$ 20; #)%6*)1 .,+%0,%，/20$+ ###， /+02；% ! 706*+*-*% ’#) (#)*+,-$*-)2$ 8$20*6，/+02 3)+,-$*-)2$ 40+5%)6+*1，=%++0 !!%，/+02） 892’),$’：A3 :2*: @ 2*O*#= .3 *PP/5/*3@ =:@*/3 *1@:.5@/3 -*@K2 ;/@.#* P: .==#* #*.P =:, @*-/5 .3.#$;/;，P: *1@:.5@/3 -*@K2; P: @@.# =:@*/3 /3 .==#* #*.O*; 0*:* 5-=.:*2，/3, 5#2/34 @:/5K#:.5*@/5 .5/2（)68）9 .5*@3* =:*5/=/@.@/3，2/@K/@K:*/@#（7))）9 .5*@3* -*@K, 2，@:/（K$2:1$-*@K$#）.-/3-*@K.3*（):/;,6#）-*@K2 .32 @K* -2/P/*2 ):/;,6# -*@K2’ 7:/34 @K* @0,2/-*3;/3.# *#*5@:=K:*;/;（! ,7+），@K* P/:;@ 2/-*3;/3 *#*5@:=K:*;/; 0.; =*:P:-*2 3 . $ 5- ;@:/= 0/@K = ) / ( #/3*.: /--/#/?*2 = 4:.2/*3@（ ABC）.32 @K* ;*532 3* 0.; =*:P:-*2 3 (!- .E =#$.5