细胞培养技术.pptx
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细胞培养技术;目录;01;细胞培养基本定义;原代与传代培养分类;技术发展历史脉络;02;实验室主要仪器清单;培养基与耗材选择标准;无菌操作设备要求;03;细胞复苏与冻存步骤;;
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试剂标注规范 试剂名称 NaCl 配制浓度 0.5 mM 配制人 张三 配制日期 2016.10.21 细胞复苏（快融） （l）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。 （2）用培养液稀释后低速离心10分钟。 （3）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 （4）隔天换液，但贴壁细胞若未贴壁则勿需处理。 复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶而损伤细胞。 细胞传代 ? ? 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为
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细胞培养技术.ppt
原代培养细胞的生命归宿 原代培养期 传代期 衰退期 每代贴附生长细胞的生长过程 培养至预定时间，每孔加入20uL新鲜配制的MTT-PBS溶液(MTT原液2.5mg/ml，使用时终浓度为0.5 mg/ml)，继续培养 4 h后终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150 μL DMSO，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。测490 nm处各孔的吸光值。(这步无需无菌操作) 材料-细胞共培养后的增殖率-MTT法 共培养至预设时间，弃培养基，换含0.5mg/mLMTT的无血清培养基，培养4h 取出材料，将悬浮液移植离心管，8000rpm离心5min，弃悬浮物 加DMSO，震动使生成物
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细胞培养技术.doc
一、设施： 1实验室房间. 2.超净工作台. 3冰箱：4℃冰箱和低温冰箱。 4显微镜（倒置显微镜＋摄像系统）。 5二氧化碳孵箱。 6离心机。 7恒温水浴箱。 8深低温保存设备：层析降温仪，液氮装置。 9抽滤装置和水纯化装置。 10角膜内皮分析仪。 11计算机。 二、组织培养和保存： (一)、组织培养的基本概念： 把体内的细胞、组织和器官放在类似体内的体外环境中，可使其存活、生长、繁殖或传代。借以观察研究其生长发育、细胞形态和功能，从血分机研究某些疾病的发病机制。严格地说来，组织培养又可分细胞培养、组织培养和器官培养。 1．细胞培养(cell culture) 是将机体内
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MDCK细胞培养 技术 肖敏 2009.12.24 Contents 培养基与培养条件 细胞培养液：90 ％ MEM+10％FBS+1％PS 冻存液：90％FBS+10％DMSO 培养箱温度：37℃ 二氧化碳浓度：5％ MDCK细胞的复苏 仪器和耗材： 温水（37 ℃~40 ℃ ） 温度计 废液缸 培养液 吸量管 移液器 离心管（15mL） 细胞培养瓶 步骤： 在资料库中找出所要细胞的位置，并更改好资料。从-196 ℃液氮中取出细胞管，投入温
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浅谈细胞培养技术;主要内容;;下风口;超净工作台和CO2培养箱;解剖显微镜;血清〔天然成分〕：;4.细胞培养用器皿的清洗和消毒;细胞培养(cellculture)是指细胞的离体培养，是在无菌条件下，把动物或植物的细胞从机体中别离出来，置于培养皿中，并在一个适宜的环境中，给以营养物质，使之继续生存和繁殖的方法。;培养细胞的类型;贴附型细胞的生长特性;正常培养细胞的生长曲线;原代培养，或称为初代培养，就是从供体取下组织细胞后在体外进行的首次培养，中途不分割培养物。常用的原代培养方法有组织块培养法和消化培养法。;实验准备
取材、别离细胞
原代培养
维护培养;原代培养的一般流程;实验准备
取材、别离细
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《细胞培养技术》课件.ppt
细胞培养技术欢迎来到细胞培养技术课程。本课程将带领大家深入了解现代生物医学研究中不可或缺的细胞培养基础知识和技术。我们将探讨从基本原理到高级应用的全面内容，帮助你掌握实验室细胞培养的核心技能。细胞培养是当代生命科学研究的基石，它为疾病研究、药物开发和再生医学提供了重要工具。通过本课程的学习，你将掌握无菌操作、细胞维护和特殊培养技术等关键能力，为未来的科研工作奠定坚实基础。
课程概述课程目标本课程旨在培养学生掌握细胞培养的基本理论和操作技能，建立严格的无菌观念，了解不同类型细胞的培养特点，并能独立进行基础细胞培养实验。通过系统学习，使学生具备细胞培养领域的专业知识和实践能力。学习内容课程包括细胞
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细胞培养无菌技术.ppt
细胞培养无菌操作技术李伟1体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。3因而，为在一切操作中最大可能地保证无菌，每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。2即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。无菌操作技术的意义在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。01有关数据的计算要事先做好。02根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会。03【培养前准备】231原则上和外科手术相同。在利用超净台工作时，应彻底洗手，要戴口罩、着消毒衣
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细胞培养技术(20190715084705).pdf
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实用细胞培养技术 ◆ 在细胞培养中注意的一些问题 ◆ 细胞培养的实验程序 ◆ 细胞的复苏 ◆ 细胞的计数 ◆ 细胞(贴壁)的传代培养? ◆ 细胞的冻存 ◆ 悬浮细胞的培养方法 在细胞培养中注意的一些问题 环 境 由于体外培养细胞没有抗感染能力，若实验者粗心大意，技术操作不规范，也会导致污染。因而，每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠，特别是实验环境更为重要。 ★ 超净工作台 台面每次实验前要用 75％酒精擦洗，然后紫外线消毒30 min。消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置，否则会遮挡射线，降低消毒效果。一些操作用
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1.动物细胞培养技术.ppt
动物细胞培养技术 1.动物细胞的生长与培养 动物细胞的特点 进化程度高 结构、形态、成分复杂 细胞间连接形式多样 生长相对缓慢 功能全面 1.2 细胞培养总原则 (一) 细胞培养无菌无毒环境 实验室设计合理 常用设施及设备 培养器皿： 透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。 细胞培养无菌操作基本技术 工作环境及表面的处理 细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理 培养液与培养细胞的处理 (二) 细胞的营养 培养基：合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁
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（一）细胞系
初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。第63页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（二）细胞株
从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株第64页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（三）二倍体细胞
细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞。如仅数目相同，而
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免疫方法3.弱免疫原免疫方案；0天：基础免疫30天：基础免疫45天：基础免疫60天：基础免疫75天：基础免疫6个月内，至鼠血清测出抗体产生。静脉或脾内追加免疫后72~96h细胞融合。第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日免疫方法4.体外免疫：分离小鼠脾细胞，置10%~20%FCSRPMI1640培基，加适量滋养细胞与抗原（可溶性抗原0.5~5?g/ml；细胞性抗原105~106/ml），37℃，5%CO2培养3天，再分离淋巴细胞与骨髓瘤细胞，融合。第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体制备一.滋养细胞制备：1.机制：不明，通常认为这类细胞释放一种或几种生长因子，提
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三、细胞生长状况有关指标的检测方法细胞计数法01.细胞生长曲线01.细胞分裂指数01.克隆形成率01.1、细胞计数法1细胞计数法是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细胞浓度。2台盼蓝染色法用于检测存活细胞数。3注：台盼蓝染色——排除检测法，由于死细胞的细胞膜通透性发生改变，染料可大量进入却不能被排出，因而细胞被染色；而活细胞能排出细胞内的染料，因而不易着色。Trypanbluestainingofadultratcardiacmyocytesinprimaryculture.Livecellsexcludethebluedye,andsoappearclear.Dea
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实用细胞培养技术1.ppt
实用细胞培养技术 袁广卿 ◆ 在细胞培养中注意的一些问题 ◆ 细胞培养的实验程序 ◆ 细胞的复苏 ◆ 细胞的计数 ◆ 细胞(贴壁)的传代培养? ◆ 细胞的冻存 ◆ 悬浮细胞的培养方法 在细胞培养中注意的一些问题 环 境 由于体外培养细胞没有抗感染能力，即便使用设备完善的实验 室，若实验者粗心大意，技术操作不规范，也会导致污染。因而， 每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠，特别是实验环境更为 重要。 1. 培养室和