动物细胞培养技术.ppt

（一）细胞系

初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。第63页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（二）细胞株

从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株第64页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（三）二倍体细胞

细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种。第65页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（四）遗传缺陷细胞

从有先天遗传缺陷者取材（主要为成纤维细胞）培养的细胞，或用人工方法诱发突变的细胞，都属遗传缺欠细胞。这类细胞可能具有二倍体核型，也可呈异倍体。第66页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三（五）肿瘤细胞系或株

这是现有细胞系中最多的一类，我国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体接种致瘤性。第67页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三细胞系或细胞株的命名HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）

CHO：中国地鼠卵巢细胞（ChineseHamsterOvary）宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立

NIH3T3：美国国立卫生研究院（NationalInstituteofHealth）建立；每3天传代，每次接种3×105细胞／毫升。第68页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三细胞系或株的鉴定、管理和使用ATCC入库细胞要求检测项目如下：

培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等

冻存液：培养基和防冻液名称

细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性

培养液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量第69页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性

核型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无

无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等

物种检测：检测同工酶，以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测

免疫检测：一两种血清学检测

细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名第70页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三第71页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三第72页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三第73页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三第74页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三细胞凋亡细胞凋亡:是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞自杀，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。细胞程序性死亡（programmedcelldeath，PCD）:指生理性细胞死亡。描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。第75页，讲稿共100页，2023年5月2日，星期三细胞凋亡与坏死的区别——————————————————坏死凋亡1.性质病理性，非特异性,非遗传性生理性或病理性，特异性遗传性2.诱导因素强烈刺激（极端环境），随机发生较弱刺激，非随机发生3.生化特点被动过程，无新蛋白合成，主动过程，有新蛋白合成，不耗能耗能4.形态变化细胞结构全面溶解、破坏、胞膜及细胞器相对完整细胞肿胀细胞皱缩，核固缩5.DNA电泳弥散性降解，电泳呈均一