动物细胞培养与核移植技术.pptx

2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植技术 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础 什么是动物细胞培养? 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 主要是蛋白质；用胃蛋白酶不行，胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去，为什么？ 因为这些细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养 转入培养液中进行原代培养 因为一般来说，细胞传至10-50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时，少部分细胞会客服细胞寿命的自然极限，获得不死性，发生突变，朝着等同于癌细胞的方向发展。 因此，目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 (二) 过程 1、无菌、无毒的环境 (三) 动物细胞培养的条件 对培养液和所有培养用具进行无菌处理 添加一定量的抗生素，防止污染 定期更换培养液，以便清除代谢产物 2、营养（合成培养基） 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、动物血清、血浆等 补充合成培养基中缺乏的物质，保证细胞能够顺利生长和增殖。 3、温度和PH (三) 动物细胞培养的条件 细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近 哺乳动物多以36.5 +0.5度 为宜 多数细胞生存的适宜PH为7.2-7.4 4、气体环境 是细胞代谢所必需 O2和CO2 主要是维持培养液的PH 通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养。 1、生产具有重要价值的生物制品。 2、为基因工程提供受体细胞。 3、用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 4、用于生理、病理、药理等方面的研究。 (四) 动物细胞培养技术的应用 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 传代培养 用培养液稀释 过程 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 (一)、 动物细胞核移植概念： (二)、体细胞核移植的过程： 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 为了使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞（供体细胞） 过程 供体体细胞 细胞培养 供体细胞 卵巢卵母细胞 去核 去核卵母细胞 重组胚胎 代孕母体 生出与供体遗传物质基本相同的个体 减Ⅱ中期 注入 细胞融合 胚胎移植 (三)、体细胞核移植技术的应用前景： 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程，促进优良畜群繁育。 2、保护濒危物种，增加濒危物种的存活数量 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植供体 4、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 (四)、体细胞核移植技术存在的问题： 1.成功率非常低 2. 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等 3、克隆动物食品的安全性问题 动物细胞培养 植物组织培养 植物细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基性质 原理 P49讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏(P49小资料）。 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左 右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基 础，通常采用传代10代以内的细胞。 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自