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第七章基因工程简介

GeneEngineering

基因工程

人工进行基因切割、重组、转移和表达的技术。

按照人类的需要把这种生物的这个“基因”与

那种生物的那个“基因”重新“施工”，“组

装”成新的基因组合，创造出新的生物。这种

完全按照人的意愿，由重新组装基因到新生物

产生的生物科学技术，就被称为“基因工程”，

或者称之为“遗传工程”。

1相关概念

克隆（clone）：来自同一原始的相同副本或拷贝的集合。

分子克隆（指DNA克隆）

工具酶

限制性核酸内切酶

逆转录酶

Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合酶

DNA连接酶等

载体（vector）：能携带目的基因，实现无性繁殖所采用

的可独立复制的完整DNA分子，又称克隆载体。其中为表

达出蛋白质设计的载体又称表达载体

目的基因：应用重组DNA技术所要分离、获得的基因

cDNA（complementaryDNA）：是指经反转录合成的，与

mRNA互补的单链DNA

基因组DNA（genomicDNA）

2限制性核酸内切酶

限制性内切酶（restrictionendonuclease）

识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双

链DNA的一类内切酶

是细菌内存在的保护性酶，分为I、II、III三类。II

类酶识别序列特点为回文结构

······GGATCC······

······CCTAGG······

限制性内切酶作用后产生两种末端：

钝性末端（bluntend）

粘性末端（stickyend）

HincIIBamHI

GTCGACGGATCC

CAGCTGCCTAGG

GTCGACGGATCC

++

CAGCTGCCTAGG

3载体（vectors）

质粒载体（Plasmidvecters）

噬菌体载体

Cosmids（粘粒）:acceptbetween38and53

kbofDNAandsincemostcosmidsare

about5kb,between33and48kbofDNA

canclonedinthesevectors.

YACs（酵母人工染色体）

真核载体（Eukaryoticvectors）

克隆质粒载体的设计要求

独立于宿主基因组的自我复制性

容易从宿主细胞中分离

筛选标志

一般一个标志足够

含融合产物的需2个标志：2个抗生素抗性

蓝白斑筛选

多克隆位点（mcs）

抗性插入失活筛选

AmprTcr

BBXB

pBR322

oriAmprBAmpr