细胞因子的检测和应用.pptx

细胞因子的检测及应用;发展历史和命名 ;概述 ;共同特点 1) 正常休止状态的细胞必须经刺激和活化后才能合成和分泌CKs, 细胞内无细胞因子前体储存,接受刺激后从激活基因开始至合成,分泌,刺激结束后细胞因子的产生随即停止.。 2）绝大多数CKs均为低分子量（4～80kD）的糖蛋白。 3） 分泌特性：大多数的CKs是通过旁分泌（paracrine） ，或自分泌（autocrine），少部分通过内分泌的形式作用于远处靶细胞或靶器官； 4）多样性：一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型细胞也可产生一种或几种相同的细胞因子。 5）网络性：协同效应；重叠效应；拮抗效应。 6）高效性：它们的受体亲和力高，表现很强的生物学活性，是免疫球蛋白等分子远不能及的 。 7)非特异性:细胞因子多由免疫细胞在特定抗原或丝裂原刺激下所产生,但其对靶细胞发挥功能却为非特异性,也不受MHC限制.; 3．分类 白细胞介素（interferon）IL 干扰素（interferon）IFN 肿瘤坏死因子 （TNF） 集落刺激因子（CSF） 生长因子（grow factor）GF 趋化因子 ;细胞因子检测;生物学检测法(1)细胞增殖法;3H-TdR掺入法;;MTT法;(2)靶细胞杀伤法 ;; (3)趋化活性测定法 ;;;;免疫学检测法;流式细胞技术flow cytometry ;流式细胞术检测细胞内细胞因子 cytokines in cell Detection by flow cytometry ;分子生物学检测法 (DNA );;分子生物学检测法;实时荧光PCR技术;TaqMan技术;“分子信标”技术;分子生物学检测法(mRNA );原位杂交　　将标记的特异DNA或RNA探针与细胞内染色体上相应的DNA形成稳定的杂交体。此法可用于细胞因子基因的组织细胞及染色体定位。 原位PCR　　原位杂交的应用受到其敏感性的影响，而细胞因子的基因均为单拷贝，有时不能被检出。原位PCR就是以特定的DNA或RNA为模板，在细胞核内原位进行扩增。而扩增产物因分子较大，或互相交织，不宜透过细胞膜而保留在原位。在应用原位杂交技术将其检出。 ;细胞因子受体检测技术;细胞因子受体检测技术;细胞因子受体检测技术;三种细胞因子测定方法的比较 ;;细胞因子测定的临床应用原则;细胞因子测定的临床应用;细胞因子测定的临床应用现状;粘附分子的检测及应用;细胞粘附分子（cell adhesion　molecules,CAM）是众多介导细胞间或细胞与细胞外基质（extracellular matrix,ECM）间相互接触和结合分子的统称。 粘附分子以受体－配体结合的形式发挥作用，是细胞与细胞间，细胞与基质间，或细胞－基质－细胞间发生粘附，参与细胞的识别，细胞的活化和信号转导，细胞的增值与分化，细胞的伸展与移动，是免疫应答、免疫发生、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理和病理过程的分子基础。;分类：据结构特征可分为整合素家族、选择素家族、免疫球蛋白超家（IgSF）、钙粘蛋白家族等。 存在形式：细胞膜表面表达和可溶性两种形式。 含量：正常情况下可溶性粘附分子含量很低，在病理情况下由于细胞因子、内毒素或凝血酶的参与，细胞膜表面的ＡＭ释放或合成无跨膜区和胞质区的小分子量ＡＭ。 ;;细胞表面粘附分子的检测 1．放射免疫测定法　　 2．免疫荧光测定法　　 3．酶免疫测定法　　主要为双抗体夹心ELISA，本法应用最广，但仅能检出一群细胞的表面粘附分子数量，而不能反映单个细胞粘附分子数量的变化。 可溶性粘附分子的检测 多采用双抗体??心ELISA，研究最多的是选 择素家族和免疫球蛋白超家族。 ;分子生物学方法;PCR-RFLP方法;细胞粘附分子测定的应用;可溶性粘附分子测定的应用： 选择素家族有E、L、P三型，均可见血液中。溶血性尿毒症和血小板减少性紫癜患者血液中，P选择素比正常人高２-３倍，而败血症、HIV感染和艾滋病患者血液中L选择素明显增高。血液中存在可溶性E选择素是内皮细胞激活的的证据，败血症、糖尿病等患者血液中E选择素水平增高，一般与疾病的活动性无关，而与器官受损程度相关。如败血症患者，可溶性E选择素可增高２０倍以上，据称与疾病的严重性或预后有关。肝炎、肝硬化等患者血液中免疫球蛋白超家族中ICAM-1水平增高，与肝功能损害指标有关。 ;THANKS A MILLION