细胞因子检测.ppt

*关于细胞因子检测第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日细胞因子一类由细胞分泌，具有多种功能的高活性小分子蛋白，参与免疫调节和多种生理病理过程等。白细胞介素(interleukin,IL)干扰素(interferon,IFN)肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF)生长因子(growthfactor,GF)趋化因子(chemokine)第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日优点：敏感、可靠；缺点：需长期饲养细胞、检测耗时长、步骤繁杂。1不同的CK具有不同的生物学活性，选择CK独特的生物学活性，即可检测。细胞增殖/抑制实验细胞病变抑制实验细胞毒实验细胞趋化实验。。。生物学检测法细胞因子的检测方法2利用抗体对抗原表位的识别，测定的是可溶性细胞因子的抗原性。ELISARIAFIAELISPOT。。。免疫学检测法优点：方便、迅速缺点：价格昂贵，结果仅代表CK的量而非活性，敏感性较低。3利用基因探针，检测特定细胞因子基因表达，即mRNA水平。斑点杂交Northern印迹细胞和组织原位杂交RT-PCR。。。分子生物学检测法局限性：仅能检测基因表达情况，不能直接提供有关细胞因子的浓度和活性，只用于机制探讨。第3页，共27页，星期日，2025年，2月5日待检样品(细胞上清)指示细胞（CTLL-2）IL-2依赖细胞系按不同稀释度加入37oC，16-20小时加入3HTdR（1-5?Ci）37oC，4-6小时收集细胞测定细胞增殖实验第4页，共27页，星期日，2025年，2月5日细胞病变抑制实验待检样品（细胞上清）IFN-?指示细胞（wish）按不同稀释度加入37oC，4小时37oC，24-48小时弃取上清，加入VSV(水泡性口炎病毒)观察细胞病变（镜检或比色）第5页，共27页，星期日，2025年，2月5日UsingCFSEtotrackCMLprogenitorproliferationSDMSDM+Glivec第6页，共27页，星期日，2025年，2月5日CalculationofProliferativeIndex(P.I.)CFSE---43210TheProliferativeIndexisthesumofthecellsinallgenerationsdividedbythecalculatednumberoforiginalparentcells.Itisusefulforcomparingquantityofcelldivisionbetweenculturesofthesamecellsundergoingdifferenttreatments.第7页，共27页，星期日，2025年，2月5日CellProliferationELISAKit,BrdU(colorimetric)第8页，共27页，星期日，2025年，2月5日Chromium-51(51Cr)releaseassays?第9页，共27页，星期日，2025年，2月5日计数受趋化细胞趋化因子细胞趋化实验示意图微孔滤膜第10页，共27页，星期日，2025年，2月5日用示踪物质标记抗体或抗原，使其与相应的抗原或抗体反应，使微量的、不可见的反应成为可见的或可测定的。免疫标记技术第11页，共27页，星期日，2025年，2月5日高通量细胞因子检测CBA(CytometricBeadArray)是一种微珠多用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其采用夹心法分析策略，与传统的ELISA分析技术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已知的标准品和对照标准曲线就可以得出被测样本的浓度。此分析方法不受样本量的限制，而且可以得到一个样本的多个数据。第12页，共27页，星期日，2025年，2月5日Cytokinenetwork第13页，共27页，星期日，2025年，2月5日第14页，共27页，星期日，2025年，2月5日第15页，共27页，星期日，2025年，2月5日CBA原理示意图第16页，共27页，星期日，2025年，2月5日第17页，共27页，星期日，2025年，2月5日LabInvest2003,83:1131–1