黄曲霉M1检测方案2.doc

黄曲霉毒素M1检测方案 方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法 （GB 5413.37-2010第二法） 一、原理： 亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。 二、所需仪器 1、高效液相色谱仪 （配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能够测定0.02 ng的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)） 2、离心机（转容50ml角转子，转速10000r/min） 3、氮吹仪 4、固相萃取装置（带真空系统） 5、水浴锅（温控30℃±2℃，50℃±2℃；温范25℃~60℃） 6、天平：感量为0.01 g 7、PH计：精度0.01 8、旋转蒸发仪（奶油样品制备） 9、紫外分光光度计（标液浓度的校正，波长范围为200nm~400nm） 三、试剂及耗材 1、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱 2、黄曲霉毒素M1标准品 3、反相色谱柱 C18 4.6*250 加有反相色谱材料的保护柱 5、移液管：1ml, 2ml, 50ml 6、烧 杯：50ml, 250ml 7、分液漏斗：250ml（干酪和奶油样品制备） 8、容量瓶：100ml 9、一次性注射器：10ml, 50ml 10、针式过滤器（水系）0.22um，Φ13 11、乙腈(CH3CN)：色谱醇 12、甲醇：分析醇 13、三氯甲烷：分析醇 14、石油醚：分析醇 15、带刻度的磨口锥形玻璃试管：5 mL、10 mL、20 mL 16、离心管：50ml 四、操作方法依据GB 5413.37-2010第二法 五、供应产品明细 品名 规格 报价 品牌 备注 高效液相色谱仪 荧光检测器 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱 25支/盒 5130.00 德国R-Biopharm 可供选择 25支/盒 3900.00 agela 离心机 天平 方案二、酶联免疫吸附法 （可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1） 一、原理 标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。再加入黄曲霉毒素M1酶标记物，将没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。最后加入终止液，用酶标仪在450nm测定吸光度值，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素M1含量成反比。 二、所需仪器和耗材 1、微孔板酶标仪450nm/630nm 2、冷冻离心机（转容10ml角转子和50ml角转子，转速不低与3500转/ min） 3、天平：感量为0.01 g 4、微量移液器：单道20(l～200(l、200(l～1000(l、多道250(l 5、振荡器 6、刻度移液管：25ml 7、洗耳球 8、三角瓶：100ml 9、聚苯乙烯离心管：10ml/50ml 10、去离子水 三、操作方法详情见黄曲霉毒素M1酶联免疫试剂盒说明书 四、供应产品明细 品名 规格 报价 品牌 备注 微孔板酶标仪 35000.00 德国R-Biopharm 黄曲霉毒素M1酶联免疫试剂盒 96孔 4950.00 德国R-Biopharm 可供选择 96孔 3000.00 博纳艾杰尔 48孔 1800.00 博纳艾杰尔 微量移液器 20(l～200(l 1650.00 美国 Thermo 微量移液器吸头 20(l～200(l 1000支/包 40.00 国产 Thermo配套价格：150.00,可选择 微量移液器吸头盒 20(l～200(l 15.00 国产 微量移液器 200(l～1000(l 600.00 美国 Thermo 微量移液器吸头 200(l～1000(l 500支/包 40.00 国产 Thermo配套价格：150.00,可选择 微量移液器吸头盒 200(l～1000(l 15.00 国产 微量移液器 多道250(l 2600.00 美国 Thermo 8道 微量移液器吸头 多道250(l 1000支/包 40.00 国产 微量移液器吸头盒 多道250(l 15.00 国产 方案三、双流向酶联免疫法 （GB 5413.37-2010第四法） 一、原理 利用酶联免疫竞争原理，样品中残留的黄曲霉毒素M1与定量特异性酶标抗体反应，多余的游离酶 标抗体则与酶标板内的包被抗原结合，通过流动洗涤，加入酶显色底物显色后，与标