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免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1

一、1.引言

(1)黄曲霉毒素M1是一种常见的真菌毒素，主要污染乳及乳制品，对人类健康构成严重威胁。由于黄曲霉毒素M1的致癌性和毒性，对其在食品中的检测和限量控制成为食品安全领域的重要任务。近年来，随着食品安全意识的提高，对乳及乳粉中黄曲霉毒素M1的检测技术要求日益严格。

(2)免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法（Immunoaffinitycolumnpurification-LiquidChromatographyTandemMassSpectrometry，IAC-LC-MS/MS）因其高灵敏度、高特异性和高准确性，已成为检测食品中黄曲霉毒素M1的常用方法。该方法结合了免疫亲和柱的特异性吸附和液相色谱-质谱联用技术的高分辨率检测能力，能够有效去除样品中的杂质，实现对黄曲霉毒素M1的精确定量。

(3)在乳及乳粉中检测黄曲霉毒素M1的过程中，样品前处理和检测方法的优化至关重要。免疫亲和柱净化可以有效去除样品中的干扰物质，提高检测的灵敏度。液相色谱-质谱联用技术则能提供快速、准确的检测结果。本文将详细介绍IAC-LC-MS/MS在乳及乳粉中黄曲霉毒素M1检测中的应用，并探讨相关的前处理技术和检测条件优化，为食品安全监管提供技术支持。

二、2.免疫亲和柱净化原理及操作

(1)免疫亲和柱净化（Immunoaffinitycolumnpurification，IAC）是一种基于抗原抗体特异性结合的样品前处理技术。该技术利用抗体与目标毒素之间的特异性结合，将毒素从复杂样品中分离出来。例如，在检测黄曲霉毒素M1时，常用的抗体是针对黄曲霉毒素M1的特异性抗体，其结合容量可达每毫升柱床体积10-20纳克。

(2)IAC操作通常包括样品前处理、抗体柱装填、样品上柱、毒素吸附、毒素洗脱和毒素收集等步骤。以乳及乳粉样品为例，首先将样品进行适当的稀释和酸化处理，以增加毒素的溶解度。然后，将处理后的样品通过免疫亲和柱，毒素与抗体结合而被截留在柱上。随后，使用特定的洗脱液将结合在抗体上的毒素洗脱下来，洗脱液的选择应避免干扰毒素的检测。

(3)在实际操作中，免疫亲和柱净化通常与液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）结合使用。例如，使用C18反相液相色谱柱进行分离，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱。在质谱检测方面，采用多反应监测（MultipleReactionMonitoring，MRM）模式，选择黄曲霉毒素M1的特征离子对进行定量分析。研究表明，该方法在低至0.5ng/g的检测限下，对黄曲霉毒素M1的回收率可达90%以上，准确度和精密度均达到法定要求。

三、3.液相色谱串联质谱法检测原理及操作

(1)液相色谱串联质谱法（LiquidChromatographyTandemMassSpectrometry，LC-MS/MS）是一种高效的分离和检测技术，广泛应用于食品、药品和环境样品中微量污染物的分析。在黄曲霉毒素M1的检测中，LC-MS/MS通过液相色谱（LC）的高效分离能力和质谱（MS）的高灵敏度检测能力，实现对样品中目标毒素的精确测定。

(2)LC-MS/MS检测原理基于样品在液相色谱柱上的分离，不同成分在色谱柱中的保留时间不同，从而实现混合样品的分离。分离后的单一成分进入质谱仪，通过电离过程转化为带电的离子，然后在质谱仪中进行质量/电荷比（m/z）分析。通过选择特定的离子对（如母离子和子离子）进行检测，可以实现对目标化合物的定性和定量分析。

(3)在操作过程中，样品通常经过适当的预处理，如提取、净化和浓缩等步骤，以提高检测灵敏度和减少干扰。以乳及乳粉样品为例，提取过程中常使用乙腈等有机溶剂提取黄曲霉毒素M1，然后通过固相萃取柱进行净化，去除杂质。净化后的样品进行浓缩，以减少后续分析中的流动相消耗。在LC-MS/MS分析中，样品首先通过液相色谱柱，分离后的目标化合物进入质谱仪，进行电离和扫描。通过设置合适的扫描参数，如扫描范围、碰撞能量等，可以实现对目标化合物的精确检测。在实际应用中，LC-MS/MS对黄曲霉毒素M1的检测限可达pg/g级别，定量准确度和精密度均满足食品安全法规的要求。

四、4.结果分析与质量控制

(1)在进行免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1时，结果分析是确保检测准确性和可靠性的关键步骤。分析结果通常包括定量结果、定性结果和样品的清洁度。例如，在某一批次乳粉样品的检测中，使用该方法检测出的黄曲霉毒素M1含量为2.5ng/g，与国家标准限值相比，该样品未超标。同时，通过质谱图分析，确认检测到的物质为黄曲霉毒素M1，进一步验证了结果的准确性。

(2)质量控制是保证检测结果可靠性的重要环节