《PAGE测定蛋白质的相对分子量.ppt

SDS_PAGE测定蛋白质的相对分子量.ppt * * SDS - PAGE测定蛋白质的相对分子量 一、实验目的了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并学会用这种方法测定蛋白质的相对分子量。二、实验原理聚丙烯酰胺凝胶电泳之所以能将不同的大分子化合物分开，是由于这些大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同之故，如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。 SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，它是一种阴离子去污剂，它能按一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质原有的电荷，也就消除或降低

2017-04-30 约1.81千字 9页立即下载

实验七SDS-PAGE测定蛋白质分子量教程.ppt 注意事项 1．凝胶配制过程中，TEMED要在注胶前再加入，否则凝结后无法注胶 2．凝胶聚合时要保持静止，凝胶聚合好的标志是胶与醇层（或者水层）之间形成清晰的界面。 3．样梳需一次平稳插入。梳口处不得有气泡，梳底需水平。 4．加样前，样品在沸水中加热1 min，以除掉亚稳态聚合。 5．剥胶时要小心,保持胶完好无损。思考题 1．在SDS中，当分离胶加完后，在其上加一层正丁醇（或者水）的目的是什么? 2．在SDS中分离胶与浓缩胶中均含有TEMED（四甲基乙二胺）和APS（过硫酸铵）, 试述其作用? 3．解释浓缩效应和分子筛效应。操作不难，原理复杂，建议大家把课件拷贝以供复习实验七 SDS测

2017-05-06 约字 33页立即下载

SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量.ppt SDS测定蛋白质相对分子质量【目的要求】学习SDS测定蛋白质分子量的原理。掌握垂直板电泳的操作方法。运用SDS测定蛋白质分子量及染色鉴定。【实验原理】电泳带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。 PAGE 聚丙烯酰胺凝胶（PAG）是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂四甲基乙二胺(TEMED)和引发剂过硫酸铵(AP) 的作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶作为支持介质的电泳称为PAGE。 PAGE具有电泳和分子筛的双重作用。 SDS是在蛋白质样品中加入SDS和含有巯基乙醇

2017-02-16 约字 19页立即下载

SDSPAGE法测定蛋白质相对分子量.doc SDS电泳测定蛋白质相对分子质量实验设备与试剂垂直板型电泳槽直流稳压电源微量注射器移液器水浴锅染色槽烧杯试管滴管分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl, pH8.8)：称取Tris 18.15g，加约80ml无离子水，用1 mol/L HCl调pH至8.8，无离子水定容至100ml，4℃保存浓缩胶缓冲液(0.5 mol/L Tris-HCl液, pH6.8)：称取Tris 6g，加约60ml无离子水，用1 mol/L HCl调pH至6.8，无离子水定容至100ml，4℃保存凝胶贮液：称取丙烯酰胺(Acr) 29.2

2015-09-13 约2.42千字 4页立即下载

蛋白质的分离纯化和相对分子量的测定.ppt 二、蛋白质的分离纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤 3 凝胶过滤　凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下来速度慢，而大分子物质却被排除在外部，下来的速度快，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。（二）利用溶解度差别的纯化方法 1.等电点沉淀调整溶液pH 不同蛋白在各自

2017-06-19 约小于1千字 19页立即下载

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳page测定蛋白质分子量.ppt SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定蛋白质分子量 一、实验目的： 1.学习 SDS分离蛋白质的原理； 2. 学习垂直板电泳的操作方法。二、实验原理 1、电泳： (2)影响电泳效果的因素： ①带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快； ②颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快； ③溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快； ④溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速

2017-05-29 约3.24千字 31页立即下载

蛋白质分子量测定.pptx 凝胶过滤法?SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法沉降法（超速离心法）凝胶过滤层析应用a.分离蛋白质b.脱盐c.蛋白质分子量的测定原理凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围，在此范围内，分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此，用几种已知分子量的蛋白质为标准，进行凝胶层析，以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图，绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析，根据其所用的洗脱体积，从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量。内水体积Vi外水

2025-05-28 约5.48千字 10页立即下载

SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告(参考资料).docx 仅供借鉴@ 仅供借鉴@ 1 SDS－ SDS－测定蛋白质相对分子质量一、前言聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状构造。依据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统

2024-07-11 约2.84千字 5页立即下载

实验5 蔗糖酶分离纯化产物的SDS-PAGE检测分析及蛋白质相对分子质量测定.ppt * * 蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定实验五丁鸣一、实验目的和要求 1、学习SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验基本原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳：是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区

2017-05-27 约3.76千字 20页立即下载

蔗糖酶分离纯化产物的SDS-PAGE检测及蛋白质相对分子质量测定[精选].ppt * * 五、操作步骤 1、准备电泳装置：电泳槽、电泳仪。 2、配胶及凝胶的制备（1）配制凝胶：不连续体系SDS－聚丙烯酰胺凝胶配制注：1、为去除抑制胶聚合的氧，加入AP前可进行抽气处理；2、过硫酸铵和TEMED的量应根据室温或聚合情况而定； 5 10 7.5 15 总体积 0.025 0.05 0.05 0.08 10% Ap 3.45 6.85 2.48 (3.42) 4.92 蒸馏水 0.005 0.005 0.005 0.01 TEMED 0.05 0.1 0.075 0.15 10% SDS 0.63 1.26 0.5mol/L Tris-HCL

2017-01-23 约字 6页立即下载

SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告.docx SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量一、前言聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。 HYPERLINK /doc/391243-414301.html \t _blank 催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂，以 HYPERLINK /doc/6877362-7094813.html \t _blank 四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发

2018-10-30 约8.55千字 14页立即下载

实验三SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量2014.10.08分析.ppt 六　染色和脱色染色用一块胶，另一块胶用于转膜。加入染色液，染色45分钟。脱色染色完毕，倾出染色液，加入脱色液。20～30min换一次脱色液，2～3次后可初步观察电泳条带，然后脱色过夜，直至背景清晰。七、 Mr的计算标难曲线只对同一块凝胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁移率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即可测出其分于量。八　转膜胶放在3张缓冲液浸湿的滤纸上，盖上经甲醇激活（15-30sec）的PVDF膜（切多余的膜及纸，与凝胶一样大小）排气泡，盖同样3张

2017-05-07 约6.1千字 38页立即下载

第一章 SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量.doc SDS电泳测定蛋白质相对分子质量实验目的了解SDS垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。学习并掌握SDS－PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。实验原理??? SDS电泳法，即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法，。1．在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。2．在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），SDS是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其

2017-06-15 约3.39千字 5页立即下载

实验5蔗糖酶分离纯化产物的SDS-PAGE检测分析及蛋白质相对分子质量测定.ppt * * 蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定实验五丁鸣一、实验目的和要求 1、学习SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验基本原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳：是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区

2017-05-18 约3.76千字 20页立即下载

【2017年整理】蛋白质分子量的测定.doc 成绩批改日期南京林业大学专业学号姓名日期实验四 蛋白质分子量的测定 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法一、实验原理 1.聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、形状的不同，在电场的作用下，产生不同的移动速度而分离的方法。它具有电泳和分子筛的双重作用。 2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS) ，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）。 3.SDS是阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。（空间构象破坏） 4.蛋白质与SDS分子按比例(1.4gSDS/g蛋白质)结

2017-06-09 约2.52千字 4页立即下载