《微生物学实验教程》课件.ppt

*************************************细菌生理生化实验：淀粉水解试验原理淀粉水解试验检测细菌产生α-淀粉酶和β-淀粉酶的能力。这些酶能将淀粉大分子（直链淀粉和支链淀粉）水解为麦芽糖和葡萄糖等小分子糖。淀粉与碘反应呈蓝色，而水解产物与碘不呈色。因此，在淀粉培养基上生长的产淀粉酶菌株周围形成透明区，表明淀粉被水解。操作方法在含1%可溶性淀粉的营养琼脂平板上划线接种37℃培养24-48小时在平板表面滴加稀碘液（碘-碘化钾溶液）观察菌落周围是否形成透明区测量透明区大小，评估淀粉酶活性淀粉水解试验常用于鉴别芽孢杆菌、梭菌和某些肠杆菌科细菌。芽孢杆菌（如枯草芽孢杆菌）通常淀粉水解阳性，而大肠杆菌则为阴性。该试验也用于评估微生物α-淀粉酶的工业生产潜力，这种酶在食品、纺织和造纸工业中有重要应用。细菌生理生化实验：明胶液化试验培养基准备制备含12%明胶的营养明胶培养基，分装于试管中制成直立明胶柱。菌株接种用接种针沿试管中央垂直刺种，深度约3-4cm。培养条件22°C培养最多14天，每天观察明胶液化情况。冷却检查将试管置于4°C冰箱冷却30分钟，区分真液化和假液化。结果判读根据液化形态（杯状、漏斗状、囊状或层状）和液化程度记录结果。明胶液化试验检测细菌产生明胶酶的能力。明胶酶可水解明胶中的多肽键，使明胶失去凝胶特性。真液化在冷却后仍保持液态，而假液化（仅因菌体生长）在冷却后会重新凝固。产明胶酶的细菌包括绿脓杆菌、奇异变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。该试验对鉴别肠杆菌科细菌及某些革兰阴性非发酵菌有重要价值。细菌生理生化实验：脲酶试验脲酶试验检测细菌水解尿素产生氨的能力。含脲酶的细菌能将尿素水解为氨和二氧化碳，氨使培养基呈碱性，pH指示剂（酚红）由黄色变为粉红色或鲜红色。操作方法包括：在含2%尿素和酚红的培养基上接种待测菌株，37℃培养24-48小时，观察颜色变化。根据变色速度可分为快速脲酶阳性（几小时内变色，如变形杆菌）和慢性脲酶阳性（24小时后变色，如克雷伯菌）。该试验是鉴别变形杆菌（强脲酶阳性）的重要依据，也用于区分不动杆菌与假单胞菌。细菌生理生化实验：过氧化氢酶试验原理过氧化氢酶能催化过氧化氢（H?O?）分解为水和氧气。当含过氧化氢酶的细菌与H?O?接触时，会立即产生气泡（氧气），这是肉眼可见的阳性反应。操作方法在载玻片上涂抹少量新鲜培养的菌落，滴加1-2滴3%过氧化氢溶液，立即观察是否产生气泡。也可直接在培养物上滴加过氧化氢溶液观察。结果判读阳性反应：立即产生气泡（氧气）；弱阳性：产生少量气泡；阴性：无气泡产生。发泡强度与过氧化氢酶活性相关。常见微生物反应大多数需氧菌和兼性厌氧菌过氧化氢酶阳性（如葡萄球菌、大肠杆菌）；严格厌氧菌通常过氧化氢酶阴性（如梭菌属）；链球菌属细菌（包括肺炎链球菌）为过氧化氢酶阴性。细菌生理生化实验：氧化酶试验原理氧化酶试验检测细菌产生细胞色素C氧化酶的能力，该酶能在分子氧存在下氧化某些芳香胺1试剂准备1%四甲基对苯二胺二盐酸盐溶液，需新鲜配制或冷藏避光保存2操作方法滤纸法：在滤纸上滴加试剂，涂抹新鲜培养物；直接法：直接在培养物上滴加试剂3结果判读阳性：10-30秒内变为深紫色；弱阳性：30-60秒内变为浅紫色；阴性：无色变或超过60秒变色氧化酶试验是鉴别革兰阴性菌的重要方法，尤其用于区分氧化酶阳性的假单胞菌属和氧化酶阴性的肠杆菌科。绿脓杆菌、弧菌属和奈瑟菌属通常氧化酶阳性，而大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌等肠杆菌科细菌氧化酶阴性。抗生素敏感性试验：纸片扩散法菌悬液制备取新鲜培养物调制成0.5麦氏浊度标准的菌悬液（约1.5×10?CFU/ml）平板接种用棉拭子均匀涂布穆勒-欣顿琼脂平板，确保整个表面覆盖抗生素纸片放置使用无菌镊子或分配器放置含特定浓度抗生素的纸片，相互间距离足够4培养孵育37℃培养16-18小时，避免培养过长导致抑菌圈边界模糊抑菌圈测量与判读测量抑菌圈直径（包括纸片），根据CLSI等标准判断敏感、中介或耐药抗生素敏感性试验：最小抑菌浓度测定琼脂稀释法在含有系列浓度抗生素的琼脂平板上点种标准菌悬液。培养后观察最低浓度的平板上无菌生长，该浓度即为MIC值。方法准确但耗时耗材，主要用于参考实验室和研究工作。肉汤微量稀释法在96孔板中制备含抗生素的系列稀释液，加入标准菌悬液，培养后观察无细菌生长的最低浓度。该方法可同时检测多种抗生素，是临床实验室常用方法，也可用于自动化检测系统。E-test法使用一端含抗生素梯度浓度的塑料条，放置在接种好的平板上。培养后在抑菌椭圆与条带交叉