《微生物学实验》课件.ppt

*************************************空气中微生物的检测方法沉降平板法最简便的检测方法，将打开的培养皿暴露于空气中特定时间，利用重力沉降原理收集空气中的微生物。优点是设备简单，缺点是无法精确定量，受气流影响大。撞击式采样法使用专用空气采样器，通过泵将一定体积空气高速撞击到培养基表面，微生物被捕获并培养计数。优点是定量准确，缺点是需要专用设备。过滤采样法将空气通过无菌滤膜，微生物被滤膜截留，然后将滤膜置于培养基上培养。适用于洁净度要求高的环境检测，如无菌室、层流罩。空气中微生物的检测对评估环境卫生状况、防止交叉污染和保证无菌操作区域的洁净度具有重要意义。空气中常见的微生物包括细菌（如芽孢杆菌、微球菌）、真菌孢子（如青霉、曲霉）和放线菌孢子等。进行空气微生物检测时，应选择适当的培养基（如细菌用营养琼脂，真菌用马铃薯葡萄糖琼脂或沙氏琼脂），设置合理的暴露时间（通常5-30分钟，视空气洁净度而定），选择有代表性的采样点，并注意环境因素（如温度、湿度、人员活动等）的影响。采样后的培养条件也需根据目标微生物优化，如细菌通常37℃培养24-48小时，真菌则28℃培养3-5天。沉降平板法操作步骤培养皿准备制备适当的培养基平板采样点选择确定有代表性的位置暴露采样打开培养皿盖，暴露特定时间培养计数覆盖培养皿，培养后计数菌落沉降平板法虽然操作简单，但有许多需要注意的细节以确保结果可靠。首先，采样前应确保采样区域的正常活动状态，避免特殊情况（如刚打扫、人员剧烈活动等）导致结果不具代表性。采样点高度应保持一致，通常选择离地面0.8-1.2米的工作台面高度。不同场所适用不同的暴露时间：普通室内环境通常5-15分钟，洁净区域可延长至30分钟或更长，高污染区域则缩短至3-5分钟。暴露结束后，应立即盖上培养皿盖，记录采样时间、地点和环境条件（温度、湿度、人员活动等）。培养后计数时，一般采用下列标准评估空气污染程度：5分钟暴露的平板上，一般细菌50CFU、真菌15CFU为清洁；50-100CFU为轻度污染；100CFU为严重污染。水中微生物的检测方法膜过滤法将水样通过0.45μm孔径滤膜过滤，收集微生物后将滤膜置于选择性培养基上培养。适用于清洁水源的检测，可准确计数低浓度微生物。多管发酵法即MPN法，使用不同体积的水样接种到乳糖发酵培养基中，观察产气情况推算微生物数量。适用于浑浊或含杂质水样的粪大肠菌群检测。平板计数法将水样直接或稀释后采用倾注或涂布平板法培养计数。适用于总活菌数或特定微生物的定量检测，操作简便，应用广泛。水中微生物检测是评估水质安全的重要指标。根据不同水源和检测目的，可选择不同的检测指标：饮用水通常检测总大肠菌群、粪大肠菌群和菌落总数；污水则可能还需检测肠道致病菌、耐药菌株等。采样时应使用无菌容器，通常设置采样点至少100-200mL，运输过程中保持低温（4-10℃）并尽快送检（最好在6小时内）。水质微生物检测的培养基选择也十分重要：总菌落数通常使用营养琼脂或平皿计数琼脂；大肠菌群检测可使用乳糖胆盐发酵培养基、EMB琼脂或EC培养基；特定病原菌则需使用相应的选择性培养基。现代检测中，越来越多地采用快速检测方法，如ATP生物发光法、荧光染色法和分子生物学方法等，提高了检测速度和灵敏度。土壤微生物的检测方法10?每克耕地土壤细菌数量级健康土壤微生物丰富多样10?每克土壤真菌数量级包括霉菌、酵母和担子菌10?每克土壤放线菌数量级对土壤生态系统功能至关重要10?每克土壤原生动物数量级调节细菌和真菌种群土壤微生物检测的首要步骤是样品制备，包括采样、预处理和稀释。采样时应选择具有代表性的采样点，采集5-20cm深度的土壤，装入无菌容器。预处理包括去除杂质、过筛（2mm孔径筛网）和混匀。由于土壤微生物种类多样且数量庞大，通常需要进行高倍数稀释（10??-10??），采用10倍系列稀释法，使用0.85%生理盐水或0.1%蛋白胨水作为稀释液。土壤微生物计数常用的方法包括平板计数法、MPN法和直接镜检法。培养基的选择需根据目标微生物群体：一般细菌可使用营养琼脂或土壤提取物琼脂；真菌适用马铃薯葡萄糖琼脂或沙氏琼脂（添加抗生素抑制细菌生长）；放线菌可选用高氏一号培养基；特定功能微生物则需使用专门的选择性培养基，如固氮菌培养基、纤维素分解菌培养基等。微生物的分离纯化技术样品制备采集适当样品并进行预处理初级分离通过适当方法在混合培养物中形成分散菌落2挑取单菌落选择目标菌落进行转移纯度检验通过形态观察和培养确认纯度微生物分离纯化是获得纯培养物的关键技术，其基本