环境微生物学实验演示课件.ppt

3、品红亚硫酸钠培养基（供平板分离用） 蛋白胨 10g 乳糖 10g K2HPO4 3.5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000mL 无水亚硫酸钠 5g左右 5％的碱性品红乙醇溶液 20mL pH 7.2~7.4 (2)点燃酒精灯。 (3)接种 用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下： 1)手持试管 将菌种和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中．使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。 2)旋松管塞 先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。 3)取接种环 右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌．然后将有可能伸入试管中的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作．再灼烧一次。 4)拔管塞 用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。见图4—6(a)所示。 图4－6 试管拔塞后过火灭菌和取菌 8)塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。 9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 2、液体接种技术 (1)用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情况：如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养基容器(试管或三角瓶等)中，将接种环在液体表面振荡或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环，塞好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体中。如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无菌水．接种环把菌苔刮下研开，再把菌悬液倒入液体培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。 (2)用液体培养物接种液体培养基时，可用无菌的吸管或移液管吸取菌液接种。 3、固体接种技术 固体接种最普遍的形式是接种固体菌制剂。因所用菌种或种子菌来源不同分为： 1)用菌液接种固体料 可用菌苔刮洗制成的悬液。接种时可按无菌操作法将菌液直接例入固体培养基中，搅拌均匀。注意接种所用菌液量要计算在固体料总加水量之内，否则往往在用液体种子菌接种后含水量加大，影响培养效果。 2)用固体种子接种固体料 包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌，直接把接种材料混入灭菌的固体料。接种后必须充分搅拌．使之混合均匀。 4、穿刺接种技术 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。具体操作如下： (1)贴标签。 (2)点燃酒精灯。 (3)穿刺接种，方法如下： 1)手持试管。 2)旋松棉塞。 3)右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌； 4)用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却．再用接种针的针尖沾取少量菌种。 5)接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于斜面接种法。一种则称垂直法，如图4—8所示。尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种针自培养基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。 (6)将接种过的试管直立于试管架上，放在37℃或28℃恒温箱中培养。24h后观察结果(注意：若具有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密)。 图4－7斜面划线法（a）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b） 图4－8 穿刺接种：（a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种 四、实验报告 列表比较各种接种方法及注意事项。 五、问题和讨论 1.斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在无菌培养基上沾一下？ 2. 穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？ 实验三荧光原位杂交法检测活性污泥中的硝化细菌Detection of N