高效液相色谱法测定发酵液中表面活性素的含量.pdf

188 2009, Vol. 30, No. 06 食品科学 ※分析检测 高效液相色谱法测定发酵液中 表面活性素的含量 艾 嘉，陆兆新*，别小妹，吕凤霞，袁勇军，黄现青 (南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095) 摘 要：建立一种以高效液相色谱法测定发酵液中表面活性素(surfactin)含量的新方法。采用COSMOSIL 5C18-AR- Ⅱ(4.6×250mm)色谱柱，以乙腈(含0.1%三氟乙酸)和水(含0.1%三氟乙酸)为流动相，流速0.84ml/min，梯度洗脱， 紫外检测波长210nm，在20min内检测到表面活性素。结果表明，运用本方法在1～100mg/L范围内表面活性素浓 度与积分面积之间具有良好的相关性(r=0.9998)，精密度为1.5%，检出限为1mg/L，回收率达到91.36%。 关键词：高效液相色谱；发酵液；表面活性素 Bacillus amyloliquefaciens ES-2 ¨ AIJia，LU Zhao-xin*，BIEXiao-mei，LU Feng-xia，YUANYong-jun，HUANGXian-qing (College of Food Science, NanjingA Abstract： ES-2 by high on COSMOSIL 5C18-AR-Ⅱcolumn (4.6× Key words：HPLC；fermentation broth；surfactin 中图分类号：TS251.51 文献标识码：A 文章编号： [7-8] 表面活性素(surfactin)是一类脂肽抗生素，脂肽分 面活性素类物质 。但由于发酵天然产物成分复杂、检 子中多个氨基酸组成的肽链形成了亲水基，脂芳烃链形 测表面活性素所需时间长且难以准确定量，因此亟需一 成亲油基。其脂肪酸链上有β-OH，因而形成环形内酯 个快速、简单、准确、高效、重复性好的定量检测 结构，此外，其脂肪酸链经常由13、14或15个碳原 方法，国内文献还未见此类报道。本研究采用的高效 子构成，形成了一系列同系物，因此表面活性素通常 液相色谱不但解决了上述问题，而且回收率高，重复 [1] 性好，为表面活性素定量检测方法的建立提供了可靠的 为混合物 。表面活性素是一种高活性的生物表面活性 剂，具有抗病毒、抗肿瘤、抗支原体、抗真菌和一 依据。 [2-6] 定程度上的抗细菌活性 ，在医学和农业生物防治及食 1 材料与方法 品生物保鲜领域具有很广阔的应用前景，是很有希望开 发的环保型生物源产品。 1.1材料与试剂 在别小妹等分离出的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 菌种 ES-2为本实验室分 fmbJ和fmbR、孙力军等分离出的淀粉液化芽孢杆菌 离并保藏。 (Bacillus amyloliquefaciens) ES-2的发酵液中均检测到表 种子液体培养基(1L)：含牛肉浸膏5.0g、蛋白胨10.0g、 收稿日期：2008-05-05 基金项目：国家“863”计划项目(2006AA10Z346)；国家自然科学基金项目30871753) 作者简介：艾嘉(1982-)，男，硕士，研究方向为食品科学。E-mail：aj255@126.com *通讯作者：陆兆新