发酵饲料中乳酸含量的测定高效液相色谱法.pdf

T/NAIA0002—2020

ICS65.120

B46

团体标准

T/NAIA0002—2020

发酵饲料中乳酸含量的测定

高效液相色谱法

（征求意见稿）

2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施

宁夏化学分析测试协会发布

T/NAIA0002—2020

发酵饲料中乳酸含量的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了发酵饲料中乳酸含量高效液相色谱法。

本标准适用于发酵饲料中乳酸含量的测定。

本方法定量限：800mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过在本标准中的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，

其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标

准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新

版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T14699.1饲料采样

3原理

利用乳酸易溶于水的特点，乳酸加水超声提取后，稀释至适当的浓度，试液过滤膜进高

效液相色谱仪经C18色谱柱分离，在210nm波长下紫外检测器（或性能相当的检测器）检测，

外标法计算乳酸的含量。

4试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1乙腈（色谱纯）。

4.2磷酸（色谱纯）。

4.30.1%磷酸溶液：准确吸取1.0ml磷酸（4.2）溶于水中，定容至1000mL。

4.4氢氧化钠。

4.50.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液，按GB/T601配制和标定。

4.6酚酞。

4.70.1%酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60ml95%乙醇中，用水稀释至100ml。

5仪器和设备

5.1分析天平：感量0.0001g。

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5.2超声波清洗器。

5.3微孔滤膜：孔径0.45um。

5.4容量瓶：50mL、100mL、1000mL。

5.5高效液相色谱仪（配有紫外检测器或二极管阵列检测器）

6试样制备与保存

按GB/T14699.1规定，取代表性的样品1Kg，四分法缩减取200g装入磨口瓶中备用。

7测定步骤

7.1样品溶液制备

称取试样1g~5g(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中，加60mL水，在50℃水浴中

超声提取20min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀，过滤，取滤液稀释，使最后稀释

液中乳酸的浓度均在工作曲线之内，取部分稀释液过0.45um滤膜，滤液作为试样溶液。

7.2高效液相色谱条件

色谱柱：C18柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5um，或性能相当。

柱温：35℃。

流动相：乙腈+磷酸溶液(4.3)＝2.5+97.5(体积比)。

流速：1.0mL/min。

检测波长：210nm。

进样量：20uL。

7.3平行试验

对同一试样进行平行试验测定。

7.4空白试验

随同试样进行空白试验。除不称取样品外，均按试样步骤进行。

7.5乳酸标准储备液溶液的制备

称取乳酸约3g于500ml圆底烧瓶中，加270mL水，装上球形冷凝管，接通冷却水，加

热回流15h，冷