生物转化法生产茶氨酸的重组大肠杆菌的构建.pdf

第 24 卷第 2 期 食 品 与 生 物 技 术 学 报 Vol . 24 　No . 2 　 　 　 　　　　 　 2005 年 3 月 Journal of Food Science and Biotechnology 　 　 　　　　 Mar . 　2005 文章编号 (2005) 02004 105 　 生物转化法生产茶氨酸的重组大肠杆菌的构建 1 , 2 1 1 1 郭 亮 , 　沈 微 , 　王正祥 , 　诸葛健 ( 1. 江南大学 生物工程学院 , 江苏 无锡 2 14036 ; 2 . 南 昌大学 中德联合研究院 , 江西 南 昌 330047) γ 摘 　要 : 为构建生物转化法生产茶氨酸的基因工程菌 ,作者分析了影响大肠杆菌高效表达 谷氨 酰基转肽酶的几个主要因素. 将大肠杆菌J M 109 的 g g t 基因接入两种不同的质粒中后 ,转化大肠 γ 杆菌J M 109 ,并在一定的条件下进行表达. 通过对比 E col i J M 109 和转化子的 谷氨酰基转肽酶 γ 表达活性的不同 ,探讨了 g g t 基因的拷贝数 、启动子的强弱等几个因素对 谷氨酰基转肽酶高效 表达的影响. 实验表明 ,将含有自身信号肽和启动子的 E col i J M 109 的 g g t 基因接入高拷贝的质 γ 粒 p U C18 中 ,仅提高 g g t 基因的拷贝数不能增加 谷氨酰基转肽酶的表达量. 将含有自身信号肽 但不含有自身启动子的 E col i J M 109 的 g g t 基因接入具有 t ac 启动子的表达载体 p Et ac 中 ,发现 γ 在强启动子 t ac 的控制下 , 谷氨酰基转肽酶的表达量提高至出发菌株的 23 倍. 将构建的工程菌 用于生物转化法生成茶氨酸 ,底物转化率相应地提高至出发菌株的 17 倍. γ 关键词 : 谷氨酰基转肽酶 ;高效表达 ;茶氨酸 中图分类号 :Q 933 文献标识码 : A Construction of Recombinant E coli f or Producing Theanine GU O Lian g1 , 2 , 　SH EN Wei1 , 　WAN G Zhen gxiang1 , 　ZHU GE J ian1 ( 1. School of Biot echnology ,Sout hern Yangtze U niver sit y ,Wuxi 2 14036 ,China ; 2 . SinoGerman Joint Research In stit ut e , Nanchang U niver sit y , Nanchang 330047 ,China) γ Abstract : Several key f actor s suppo sed to