食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第18部分：荞麦（编制说明）.doc

食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法 第18部分：荞麦　编制说明 1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP） 检测方法 第18部分：荞麦 英文 Loop-mediated isothermal amplification detection method for allergen components in food Part 18:Buckwheat 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 等同 修改 非等效 标准号 / 英文名称 / 中文名称 / 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 《关于下达2012年第一批出入境检验检疫行业标准制（修）订计划项目的通知（国认科[2012]36号）》 计划编号 2012B141 1.4 制（修）订情况 制订√ 修订 替代的标准编号 / 1.5 起止时间 2012年12月-2013年12月 1.6 起草单位 中国检验检疫科学研究院、山东出入境检验检疫局 1.7 起草人 　龚方、高宏伟、孙敏、刘彩霞 1.8 专业类别 1、√食品（化妆品）检验；2、卫生检疫；3、动物检疫；4、植物检疫； 5、纺织产品检验；6、轻工产品检验；7、机电产品检验；8、化工、矿产品和金属材料检验；9、管理；10、鉴定；11包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 2 背景情况 2.1 目的、意义 荞麦又称为三角麦、乌麦、花荞，属于双子叶蓼科植物，其栽培品种为甜荞麦( Fagopyrum esculentum，Common buckwheat，简称CB) 和苦荞麦( Fagopyrum tataricum，Tartary buckwheat，简称TB)。荞麦具有较高的营养价值和药用价值，含有多种人体必需的氨基酸以及生物活性物质，能防治糖尿病、高血压、冠心病和胃病等多种疾病，对人体有极好的保健作用。然而，荞麦含有的过敏原成分会使许多接触或食用它的人产生过敏症状，甚至食品中含有痕量的荞麦成分都会导致严重的休克等过敏反应。 因此，急需建立食品中荞麦过敏成分快速检测方法及相关检测方法标准，本研究采用环介导等温扩增（lamp）方法检测食品中荞麦过敏原成分，建立高效、特异、快速检测食品中荞麦过敏成分（栽培型和野生型）的方法为进出口食品荞麦成分的鉴定提供切实可行的技术支持。 2.2 与国内外相关标准、文献的关系 目前国内已有的荞麦过敏原标准：SN/T 1961.3-2012 食品中过敏原成分检测方法 第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分 3 编制过程 3.1 准备阶段（可选项） 3.2 分工情况 山东出入境检验检疫局承担引物设计和方法建立工作，中国检验检疫科学研究院承担方法验证工作。 3.3 标准草案编写情况 2112年12-2013年7月完成标准草案的编写。 3.4 征求意见情况（适用于送审稿） 3.5 审定情况 （适用于报批稿） 3.6 预期的管理目标（适用于规程类标准）或技术指标（适用于方法类标准） 4 主要技术内容的确定 1、国内外相关的标准要求。 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 1 材料 1.1样品种类及来源 用于做引物特异性实验和lamp灵敏度实验的样品及其来源见表1。 表1样品种类及其来源 样品及样品种类 样品来源 荞麦面条 市场，中国青岛 荞麦饼干 市场，中国青岛 苦荞饼干 市场，中国青岛 苦荞茶 市场，中国青岛 荞麦粉 市场，中国青岛 小麦 市场，中国青岛 糯米 市场，中国青岛 绿豆 市场，中国青岛 花生 市场，中国青岛 玉米 市场，中国青岛 大豆 市场，中国青岛 大米 市场，中国青岛 1.2仪器 台式离心机（Eppendorf 5810 R, Germany），梯度PCR仪（Eppendorf gradient, Germany），电泳仪（EPS 301，Amersham Phamacia Biotech），核酸蛋白分析仪（Beckman DU640）， 恒温干燥箱（SANYO mov-212F，Japan）。 1.3 引物序列 名称 编号 序列 LAMP引物序列 外侧上游引物（F3） 5’- ATCCTCGGACCGAGATGG -3’ 外侧下游引物（B3） 5’- AGTCCTTCTCTTCCTGCCT-3’ 内侧上游引物（FIP） 5’-CTCCGACAACCTGGACTCTTCCAACTTGAACGCGCACAGC -3’ 内侧下游引物（BIP） 5’-AGTGTGTTCGACGACAACGTGCTCAACACCACTGCGAATCC -3’ 2 方法 2.1 样品的制备 称取各类样品2g，研磨成粉末状。 2.2 模板DNA提取 用于特异性实验的样品，每种取2g制成粉末