食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第1部分：开心果（编制说明）.doc

食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第1部分：开心果 编制说明 1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第1部分：开心果 英文 Loop-mediated isothermal amplification detection method for allergen components in food Part 1:Pistachio 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 等同 修改 非等效 标准号 / 英文名称 / 中文名称 / 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 《关于下达2012年第一批出入境检验检疫行业标准制（修）订计划项目的通知（国认科[2012]36号）》 计划编号 2012B141 1.4 制（修）订情况 制订 修订 替代的标准编号 / 1.5 起止时间 2012年01月～2013年10月 1.6 起草单位 中国检验检疫科学研究院等 1.7 起草人 陈颖、黄文胜、刘昊等 1.8 专业类别 √1、食品（化妆品）检验；2、卫生检疫；3、动物检疫；4、植物检疫； 5、纺织产品检验；6、轻工产品检验；7、机电产品检验；8、化工、矿产品和金属材料检验；9、管理；10、鉴定；11包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 2 背景情况 2.1 目的、意义 食物过敏指的是人体免疫系统对食品中的外源物质产生变态反应。食物过敏已被世界卫生组织（WHO）认定为是第四重要的公共健康问题。据统计，全世界约有3%-5%的成年人和8%的儿童患有食物过敏症，其中由小麦、花生、大豆、坚果类、牛奶、鸡蛋、鱼和甲壳类等食物引发的过敏占已知食物过敏总数的 90% 左右。开心果 ( Pistacia Vera L.) 又名阿月浑子，分类上属于漆树科、黄连木属，是高赖氨酸含量和集蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维素、维生素等5 大营养要素于一体的优质坚果类食品，常常被制成各类休闲食品并广泛添加于冰淇淋、糖果以及其他烘焙食品中。但是开心果对于特定人群有很强的致敏性，开心果过敏在临床上并不罕见，常见症状为口唇麻木，全身皮肤瘙痒潮红，伴胸闷、心悸，并逐渐丧失意识。为了避免开心果过敏患者因不知情误食而引起过敏反应，美国、欧盟均出台了相关法规，强制要求含有开心果等成分的食品包装上必须进行明确标示。我国也于2012年4月20日实施的《预包装食品标签通则》中列举了8类可能引发过敏的食品，其中之一为各类坚果及其果仁类制品，要求如果用作配料，或者在加工过程中可能带入上述食物或其制品，宜在配料表中使用容易辨识的名称，或在邻近位置加以提示。为防止食品生产者有意或无意地违反上述规定，保护相关消费者的健康，规范食品市场秩序，有必要建立适用的食品过敏原开心果及其制品的特异检测方法。 目前，食物过敏原检测方法主要有针对过敏蛋白的免疫检测方法和针对过敏原DNA的分子检测方法，过敏蛋白检测方法更为直接，但过敏蛋白在食品贮存加工过程中易受外界条件影响而失去抗原性，在实际检测中，蛋白检测更容易受到外界物理条件和食物中复杂成分的干扰，且坚果类过敏蛋白相互间交叉免疫反应较严重。因此目前急需制定在检验检疫一线的基层实验室能够普遍适用的快速、简便、准确的标准检测方法。另外，虽然实时PCR法已经比较成熟，但成本昂贵、技术要求高、耗时长，不能满足食品中开心果过敏原成分的日常监管和食品行业内部的质控需求。 随着分子生物学理论和技术的快速发展，以聚合酶链式反应 (PCR) 技 术为基础的新型鉴定技术已日益得到广泛应用。环介导等温扩增法（LAMP， Loop-mediated Isothermal Amplification）是在PCR基础上创建的一种较理想的手段，其特点是：①只需一恒定温度就能扩增反应，不需要特殊试剂，不需要预先进行双链DNA的变性；②高特异性：采用八个区段，六条引物，扩增特异性高，可以根据是否扩增来判断目标基因的存在与否；③快速、高效扩增：扩增在不到1 h即可完成，且产率高；④灵敏度高：扩增模板可达10拷贝或更少；⑤鉴定简便：在核酸大量合成时，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物-焦磷酸镁沉淀，可用肉眼观察判断扩增与否；另外，它利用恒温和低反应温度（65 ℃），减少细胞损伤，检测人员实际操作非常简便。总体而言，LAMP法是一种简便、快速、高特异的基因扩增法，不需要特殊的试剂和仪器设备，采用该方法能建立起总成本低廉的检测体系，在过敏原食品检测等领域具有广阔的应用前景。 本项目拟将LAMP检测技术应用于开心果过敏原成分检测，针对开心果 2S 球蛋白基因（Pistacia vera Pis v 1 allergen 2S albumin mRNA， D