几种植物白藜芦醇合酶基因保守序列的克隆与分析.pdf

中国农学通报 2011,27(04):129-133 Chinese Agricultural Science Bulletin 0 引言 植物次生代谢物（Plant secondary metabolites）白 藜 芦 醇（Resveratrol，Res）是 一 种 植 物 保 护 素 （Phytoalexin）[1]，对病原菌有防御作用。该化合物是一 种抗氧化剂，具有防癌[2]、抗炎[3]、预防心血管疾病[4]等 保健功能，且具有延长细胞寿命[5]的功能，因此引起了 人们的广泛关注。然而Res在自然界的含量并不丰 富，人们期望能通过植物基因工程的方法在某些植物 中大量合成该化合物或者提高葡萄等自身能够合成白 藜芦醇的植物中 Res 的含量 [6-9]。白藜芦醇合酶 基金项目：福建省科技厅重点项目（2009N1003）；福建省科技重大专项（2008NZ0002-1）。 第一作者简介：林碧英，女，1963年出生，福建人，副教授，实验室主任，学士，研究方向：蔬菜学与设施园艺方向。通信地址：350002福州金山福建农 林大学园艺学院，Tel：0591E-mail：lby3675878@163.com。 收稿日期：2010-07-28，修回日期：2010-09-15。 几种植物白藜芦醇合酶基因保守序列的克隆与分析 林碧英 1，钱 昆 1，肖 宇 2，胡鸢蕾 3 （1福建农林大学园艺学院，福州 350002；2东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030； 3北京大学蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室，北京 100871） 摘 要：克隆并分析几种植物中白藜芦醇合酶基因（resveratrol synthase，RS）的片段。根据GenBank中已 知的RS基因保守序列设计引物，采用PCR技术从葡萄科植物（蛇葡萄、三叶爬山虎、五叶爬山虎和云南 爬山虎）、桑科植物（桑树）和豆科植物（花生）的幼嫩叶片中扩增出该基因的DNA片段。测序结果表明， 片段长635 bp，6个片段均不含内含子，分别编码211个氨基酸，均包含白藜芦醇合酶基因的特异片段和 芪合酶（stilbene synthase，STS）家族特异性信号序列。利用DNAMAN软件构建系统进化树，结果显示 这6种植物与GenBank中已发表的川鄂爬山虎的RS同源性高达94%。成功获得了6种植物的RS基因 片段，并对其进行了同源性分析，为进一步克隆RS全长基因及分析其表达特性奠定基础。 关键词：白藜芦醇合酶基因；DNA；克隆；序列分析 中图分类号：Q781 文献标志码：A 论文编号：2010-2282 Cloning and Sequencing of DNA Encoding Conservative Regions of Resveratrol Synthase Genes in Leaves of Four Grape Plants Lin Biying1, Qian Kun1, Xiao Yu2, Hu Yuanlei3 (1College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002; 2College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Harbin 150030; 3State Key Laboratory of Protein Engineering and Plant Genetic Engineering, Peking University, Beijing 100871) Abstract: To clone and analysis the RS gene segment from several plants. PCR prime RS were designed according to the consensus sequence of some RS genes registered in GenBank. The results showed that 4 PCR products had 635 bp of neclotides without any introns in their DNA sequences and that they encoded 211 amino acids. All of the fragments contained the conserved structure domains of RS gene, for example, specific for RS activity core and the family sign