水中细菌总数测定.ppt

水中的细菌总数测定 培养基的配制 消毒与灭菌 水中细菌总数的测定 菌落计数法 一、水样的采集 1. 采水容器 一、水样的采集 2. 采样步骤及注意事项 二、样品保存 采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h Ⅰ 细菌总数的测定 细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后，所生长细菌菌落的总数。 Ⅰ 细菌总数的测定 二、培养基的制作 Ⅰ 细菌总数的测定 Ⅰ 细菌总数的测定 * * （一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （五）实验作业 培 养 基 的 制 备 与 灭 菌 （一）实验目的 1、明确培养基的配制原则； 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤； 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。 （二）实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基. 培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。 常用加热灭菌法： 1、干热灭菌： 用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌 2、湿热灭菌 ⑴高压蒸汽灭菌法 ⑵间歇灭菌法 ⑶煮沸消毒法 灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。 （三）实验器材 1.药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％盐酸溶液。 2.器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。 1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂20.0g,蒸馏水1000ml,pH7.0。 （四）实验方法 培养基的制备过程称量---溶解----调节pH值----过滤----分装及包扎----灭菌----灭菌后试管摆放斜面 2.溶解 向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 3.调节pH值 用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和盐酸调节PH。 4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。 5.分装及包扎 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。 6.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌20分钟。 7. 灭菌后试管摆放斜面 注 意 事 项 1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品； 2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速； 2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢； 4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2 ； 5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。 返 回 （五）实验作业 为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 消毒与灭菌 1．干热灭菌法 2．高压蒸汽灭菌 3．紫外线灭菌法 （二）高压蒸汽灭菌 1、原理 利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min 2、步骤 加水 装待灭 菌物品 加盖 加热 灭菌时间到后 断电源 压力降为零 开箱取物 （三）紫外线灭菌法 1、原理 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有杀菌作用。 适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。 2、步骤