实验四_水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离[1].pptx

实验三水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离;一实验目的;二.实验原理：;本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细菌总数。

;三、实验操作;3.将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。

注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。

;4.涂布平板法：

1）加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。

2）倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。

3）用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。

5.倒置于37℃培养箱中培养24h。;;;6.菌落计数：

1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。

2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数

3）如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30—300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。;（二）土壤微生物的分离、培养;三、实验操作

1、倒平板

将营养琼脂培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基，加热溶化，待冷至55-60℃时，马丁培养基中加链霉素（终浓度为30μg/ml），混匀后倒平板。;2、制备土壤稀释液

称取土壤10g，放入盛有90ml无菌水中，剧烈震荡20min，充分混合。用无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入9ml无菌水中，混匀，以此类推，制备成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀释度的土壤溶液。;3、涂平板

将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4，10-5，10-6种稀释度，再用无菌吸管分别吸取10-4，10-5，10-6种稀释度的土壤稀释液0.1ml，用无菌涂布棒涂布均匀后，静置5-10min。（若平板数量不足，减少10-6稀释度的平板）;4、培养

将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃恒温培养箱中培养3-5d，营养琼脂培养基平板倒置于37℃恒温培养箱中培养2-3d。;;;思考题：

为什么马丁培养基中要加入链霉素？如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？

;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。10月-2010月-20Sunday,October18,2020

10、人的志向通常和他们的能力成正比例。23:21:5023:21:5023:2110/18/202011:21:50PM

11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。10月-2023:21:5023:21Oct-2018-Oct-20

12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。23:21:5023:21:5023:21Sunday,October18,2020

13、志不立，天下无可成之事。10月-2010月-2023:21:5023:21:50October18,2020

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15、会当凌绝顶，一览众山小。十月2011:21下午10月-2023:21October18,2020

16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020/10/1823:21:5023:21:5018October2020

17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。