表皮生长因子受体抑制剂ag对人胶质瘤细胞影响实验的研究.docx

A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for theDegree of Master of MedicineThe effect of epidermal growth factor receptor inhibitorAG1478 on human glioma cellsGraduate Student:Major:Supervisor:XingXihongSurgeryDoctor Wang XiongweiChina Three Gorges UniversityYichang, 443002, P.R.ChinaMarch, 2011三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：I日期：三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂 Tyrphostin AG1478 对人脑胶质瘤 U87 细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭和迁移能力的影响，观察 AG1478 对人胶质瘤 U87 细胞化学治疗敏感性的影响，并探讨 AG1478 对胶质瘤细胞生物学行为影响的相关机制，为 AG1478 作为一种新的肿瘤治疗药物在控制人胶质瘤细胞生长、侵袭、转移和化学治疗增敏的应用上提供实验基础和理论依据。方法：（1）应用 MTT（噻唑蓝）比色法检测不同浓度 AG1478 和 AG1478 联合 CDDP作用于体外培养的人脑胶质瘤 U87 细胞 24h 和 48h 后的细胞生存率。 2）流式细胞仪检测不同浓度 AG1478 和 AG1478 联合 CDDP 作用于体外培养的人脑胶质瘤 U87 细胞 24h和 48h 后细胞周期分布和细胞凋亡的影响。（3）Transwell 小室体外侵袭实验检测AG1478 对人脑胶质瘤 U87 细胞体外侵袭和转移能力的影响。（4）明胶酶谱法检测AG1478 对人脑胶质瘤 U87 细胞 MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平的影响；（5）Western 印迹法检测 CDDP 和 AG1478 对人脑胶质瘤 U87 细胞 EGFR 信号通路分子蛋白（EGFR/p-EGFR、AKT/p-AKT、ERK/p-ERK）以及细胞周期蛋白 D1(Cyclin D1)表达的影响。结果：（1）AG1478 明显抑制体外培养的人胶质瘤 U87 细胞增殖，并呈时间和浓度依赖性,并可以阻断 EGF 促进人胶质瘤 U87 细胞增殖的作用。（2）AG1478 可以诱导人胶质瘤 U87 细胞发生凋亡；阻滞细胞于 G0-G1 期，呈浓度依赖性。（3）AG1478 可以抑制人胶质瘤 U87 细胞体外侵袭和迁移能力。（4）AG1478 抑制人胶质瘤 U87 细胞p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK、MMP-2、MMP-9 和 CyclinD1 蛋白的表达。（5）CDDP 具有 EGF 促进人胶质瘤 U87 细胞 EGFR、ERK 和 AKT 蛋白磷酸化的作用，AG1478可以阻断 EGF 和 CDDP 对人胶质瘤 U87 细胞 EGFR 信号通路分子活化的作用。6）AG1478通过增加 S 期细胞数和抑制 CDDP 活化人胶质瘤 U87 细胞 EGFR 信号通路活化而增强CDDP 对胶质瘤细胞生长的抑制作用。结论：AG1478通过诱导人胶质瘤 U87细胞凋亡，阻滞细胞周期进程，阻断细胞EGFR信号传导通路、下调 MMP-2、MMP-9 和 CyclinD1 蛋白的表达来抑制体外人胶质瘤 U87细胞增殖、侵袭和转移能力，AG1478还增强人胶质瘤 U87细胞对 CDDP的化学治疗的敏感性，有望成为人胶质瘤靶向治疗和提高化学治疗疗效的新药物。关键词：胶质瘤表皮生长因子受体