SN_T 4262-2015出口乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类防腐剂的测定 高效液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4262—2015出口乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的测定高效液相色谱法Determination of benzoic acid,sorbic acid and p-hydroxybenzoic acid estersantiseptics in milk and dairy products for export-HPLC Method2015-05-26发布2016-01-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4262—2015前言本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、重庆出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：陈冬东、王俊苏、周超、马萍、郑小玲、代汉慧。I SN/T 4262-—2015出口乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯的测定方法。本标准适用于牛奶、酸奶、奶粉及乳酪中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯的测定。2方法提要试样经甲醇提取，用亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀蛋白质，取上清液供液相色谱检测，外标法定量。3试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水或相当纯度的水。3.1甲醇:HPLC级。3.2盐酸。3.3乙酸铵。3.4乙酸锌。3.5亚铁氰化钾。3.6盐酸溶液（1mol/L）：取90mL盐酸加水定容至1000mL。3.7乙酸锌溶液（219g/L）：称取乙酸锌219g，加水定容至1000mL。3.8亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取亚铁氰化钾106g，加水定容至1000mL。3.90.02mol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵定溶于1L水中。3.10苯甲酸标准品（Benzoicacid，CAS号65-85-0）：纯度大于等于99%。3.11山梨酸标准品（Sorbicacid,CAS号110-44-1）：纯度大于等于99%。3.122对羟基苯甲酸甲酯标准品（4-Hydroxybenzoicacid-methylester，CAS号99-76-3）：纯度大于等于99%。3.13对羟基苯甲酸乙酯标准品（4-Hydroxybenzoic acid-ethyl ester，CAS号120-47-8）：纯度大于等于99%。3.14对羟基苯甲酸丙酯标准品（4-Hydroxybenzoic acid-propyl ester，CAS号94-13-3）：纯度大于等于99%。3.15对羟基苯甲酸丁酯标准品（4-Hydroxybenzoic acid-n-butyl ester，CAS号94-26-8）：纯度大于等于99%。3.16对羟基苯甲酸异丁酯标准品（4-Hydroxybenzoicacid-iso-butyl ester，CAS号4247-02-3）：纯度大于等于99%。1 SN/T4262-20153.17标准储备液：准确称取适量上述标准品，分别用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液，0℃～4℃避光保存。3.180.45μm微孔滤膜：有机系。4仪器和设备4.1液相色谱仪，配可变波长紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2天平：感量为0.1mg，0.01g。4.3旋涡混匀器。4.4超声萃取仪。5试样的保存乳及乳制品试样于0℃～4℃冰箱内保存。样品保存过程中，应防止样品受到污染。6测定步骤6.1提取6.1.1液态试样称取5g试样（精确至0.01g）于25mL离心管中，加人1mL盐酸溶液（3.5），20mL甲醇，超声提取20min后，加人1mL乙酸锌溶液（3.6)和1mL亚铁氰化钾溶液（3.7），用甲醇定容至25mL，静置分层，取上清液过0.45μm微孔滤膜（3.17），待液相色谱仪测定。6.1.2固态试样称取5g试样（精确至0.01g)于25mL离心管中，加人10mL水，充分混匀，加人1mL盐酸溶液，10mL甲醇，超声提取20min后，加人1mL乙酸锌溶液和1mL亚铁氰化钾溶液，用甲醇定容至25mL，静置分层，取上清液过0.45μm微孔滤膜，待液相色谱仪测定。6.2测定6.2.1液相色谱条件液相色谱条件参考如下：a)液相色谱仪，配可变波长紫外检测器或二极管阵列检测器；b)色谱柱：Cs柱250mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者；c)流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液，梯度程序参见附录A表A.1