文档详情

快速连接试剂盒使用说明.pdf

发布:2017-07-25约1.65千字共3页下载文档
文本预览下载声明
快速连接试剂盒使用说明 货号:QL0010 规格:20T 保存 :-20 ℃保存。 产品内容: T4 DNALigase 20ul(4U/ul) 2 ×Quick Ligation Buffer 200ul 产品简介: 快 速 连 接 试 剂 盒 所 带 T4 DNA Ligase 能 催 化 dsDNA 、 dsRNA 或 DNA/ RNA 的 5 ’-磷酸末端和 3 ’-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能催 化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA 、RNA 或 DNA/ RNA 杂交双链中的单链切 口,在 2 ×Quick Ligation Buffer 中,室温(25 ℃) 下反应 5 分钟即可完成连接反应,反应液可直接用于转化,使用方便、快捷, 极大地缩短了试验时间。本试剂盒可应用于 DNA 片段克隆入载体、文库构建、 TA 克隆、Linker 连接以及线性 DNA 的再环化等试验。 单位定义: 在 2ul 连接反应体系、0.12uM (300ug/ ml )的 5 ’-末端浓度条件下, 16 ℃反应 30 分钟,能使 50 ﹪Hind III 消化的 λDNA 片段连接上所需的酶量 定义为一个活性单位。 使用方法: 1、按下面配制反应体系 2 ×Quick Ligation Buffer 10ul 载体 50ng 插入片段 50-150ng T4 DNA Ligase 1ul dd H2O up to 20ul 2、室温下反应 5 分钟,反应产物冰上冷却,然后直接用于转化或冻存 于-20 ℃。注意不要热失活,热失活会急剧降低转化效率。当插入片段超过 1.5kb 时,延长反应时间至 15-30 分钟。 注意事项: 1 、2 ×Quick Ligation Buffer 用前应彻底混匀,避免反复冻融,可适当 分装成小份以保证质量。 2、为保证有效连接,总的载体 DNA 与插入片段的总浓度应在 1-10ug 之间。对单插入来说,插入片段:载体比例在 1:2-1:6 之间最好,低于 2:1 会 降低连接效率,高于 6:1 会产生重复插入。 3、如果是做电转化,请将连接产物纯化后再进行电转化。 相关试剂 : T1060 50 ×TAE 缓冲液 G8142 GoldView ‖型核酸染色剂(5000 ×) D1010 6 ×DNA Lodding Buffer C1100 DH5 α 感受态细胞 C1200 TOP10 感受态细胞 D1100 质粒小量提取试剂盒 D1200 琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 D1300 DNA 产物纯化试剂盒
显示全部
相似文档