蛋白纯化试剂盒使用说明书.doc

蛋白纯化试剂盒使用说明书 介绍 试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6 Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组氨酸标签的蛋白。Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 有很高的蛋白结合能力，低镍离子（Ni2 +）的泄漏以及可与变性剂和广泛的添加剂相兼容。澄清和非澄清的样品可使用该柱。特殊的frits在纯化过程可防止介质变干燥。一次纯化平均需要30分钟。在变性下纯化，请自备额外的结合缓冲液和洗脱液。 特征 柱材料 聚丙烯桶，聚乙烯筛板 介质 Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 平均粒径 90 μm 蛋白结合能力 约6 mg组氨酸标签蛋白/1毫升树脂 床体积 1 mL/柱 使用时兼容性 在各种通用缓冲液，洗涤剂和变性剂中稳定 避免在缓冲液中 含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等 pH稳定性，短期（2h） 2-14 储存 20%乙醇 保存温度 4或30℃ 与NI-IDA树脂相兼容的试剂 还原试剂 5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇) 5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇) 20 mmol/L β-巯基乙醇 5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯) 10 mmol/L 还原型谷胱甘肽 变性剂 8 mol/L尿素 6 mol/L 盐酸胍 洗涤剂 2% TritonX-100(非离子物质) 2% Tween 20（非离子物质） 2% NP-40 (非离子物质) 2% 胆酸盐 1% CHAPS（两性离子） 其他添加剂 20% 乙醇 50% 甘油 100 mmol/L Na2SO4 1.5 mol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 60 mmol/L柠檬酸盐 100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4 缓冲液 100 mmol/L Tris-HCl pH 7.4 100 mmol/L Tris pH 7.4 100 mmol/L HEPES pH 7.4 100 mmol/L MOPS pH 7.4 100 mmol/L 醋酸钠 pH 4 注意： 1.为了最佳的操作过程，按照上述纯化步骤进行预洗以除去任何削弱结合镍离子的物质。柱子不用时柱内不要留有缓冲液，因为该缓冲液内含还原剂。 2.由于需要保持较高粘度，所以在室温下使用。 3.通常螯合剂需谨慎使用（即仅在样品中而非缓冲液中使用）。任何金属离子的剥离可通过在离心/过滤样品前添加少量过量的MgCl2来抵消。 推荐使用的缓冲液 自然条件下 结合/洗涤液（含10 mmol/L 咪唑）： BSP030-3 洗脱液（含250 mmol/L 咪唑）：BSP030-4 变性条件下 结合/洗涤液：20 mmol/L Tris-HCl，8 mol/L 尿素，500 mmol/L NaCl，5 mmol/L 咪唑，pH 8.0 洗脱液 20 mmol/L Tris-HCl，8 mol/L 尿素，500 mmol/L NaCl，500 mmol/L 咪唑，pH 8.0 注意：样品和缓冲液中适当浓度的咪唑对获得最大的纯化是必需的，而且产量因蛋白而不尽相同。自然条件下，20-40 mmol/L 的咪唑的几盒缓冲液对许多蛋白已经足够。洗脱液中500 mmol/L 咪唑绝大多数情况下完全可洗下目的蛋白。 样品准备 自然条件下由大肠杆菌表达的含多聚组氨酸标签蛋白样品的准备（主要以可溶模式表达）。 1. 对于大肠杆菌表达的蛋白。稀释细胞团：家5-10毫升结合缓冲液稀释细胞团。样品和结合缓冲液需含同样浓度的咪唑以防止宿主细胞的蛋