第三章基因克隆载体基因工程课件.pdf

基因工程第三章克隆载体.ppt *第二节病毒载体virusvector什么是病毒?病毒：由DNA（或RNA）和外壳蛋白组成，经包装后成为病毒颗粒。1/31噬菌体的溶原性周期和溶菌性周期2/31天然的转基因过程1.λ噬菌体克隆载体*λ噬菌体（Bacteriophagelambda）头部尾部尾丝3/311.1、λ噬菌体的性质*4/31线状，双链DNA，48502bpλDNA：01cos位点：λDNA两端各有12bp的粘性末端，两者互补，进入宿主后可连成环状DNA。（linear，double-strandedDNA，dsDNA）02宿主细胞头部尾部尾丝λDNA5/316/31*（2）λDNA有56个限制酶识别序列，50个基因，左

2025-02-10 约1.75千字 10页立即下载

基因工程第三章 分子克隆载体.ppt * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *

2016-06-18 约2.98万字 280页立即下载

第三章-基因工程载体.ppt 第三章基因工程载体基因克隆载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 基因克隆载体(DNA克隆载体)：通过不同途径能将承载的外源DNA片段(基因)带入受体细胞，并在其中得以维持的DNA分子。载体的功能及特征一、发展概况 1.??第一阶段（1977年前）：天然质粒和重组质粒的利用，如pSC101, colE1, pCR, pBR313和pBR322 (1977, Bolivar et al) 2.??第二阶段：增大载体容量（降低载体长度），建立多克隆位点区和新的遗传标记基因。如pUC

2019-02-15 约1.34万字 130页立即下载

3.第三章基因工程载体.ppt DNA重组技术的基本工具;;;;;;;;;;;;;3. 质粒的基本特性质粒的自主复制性质粒的不相容性质粒的可转移性携带特殊的遗传标记;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;噬菌体的生活周期溶菌周期：烈性噬菌体（virulent phage) 感染细菌后立即在菌体内复制和合成蛋白质外壳，重新组装成噬菌体颗粒，并导致细菌细胞解体，释放出大量子代噬菌体。 2. 溶源周期：温和噬菌体（temperate phage) 感染细菌后，将自己的DNA整合到细菌的染色体DNA中，成为它的一个组成部分。形成这一过程称为溶源化（lysogenization)。;;;;;;;;;;

2017-05-25 约2.62千字 84页立即下载

3.第三章基因工程载体.ppt 表达形式单一型表达：单一基因的编码区，表达完整单一蛋白。融合型表达：多个基因的编码区的串联体，表达出融合蛋白(fusion protein)。融合标签蛋白：有利于蛋白纯化和检测；融合多个目标蛋白：则类似于直接表达了一个多酶复合体一样，可减少载体构建难度，而且可以偶连两个或多个相关基因的表达。一、质粒表达载体表达形式组成型表达：在组成型启动子（如：T7噬菌体启动子）的驱动下即可源源不断的表达外源基因。适合对宿主细胞无毒的蛋白表达。诱导型表达：在诱导型启动子和特定环境信号刺激下，外源基因的表达开放或增强。适合有毒蛋白表达，无毒蛋白表达也可。

2017-05-19 约9.84千字 84页立即下载

基因工程基本原理-第三章基因克隆载体.ppt 2. YEp24（酵母游离型质粒）载体出发质粒：酵母2mm质粒和pBR322 ura3基因：尿嘧啶合成缺陷型基因酵母V号染色体上的一个基因，系统命名号为YEL021W，编码乳清苷5-磷酸脱羧酶，是酵母RNA嘧啶核苷酸合成过程中关键酶。应用方式：（2）阴性选择：乳清苷5-磷酸脱羧酶正常（1）阳性选择：乳清苷5-磷酸脱羧酶缺陷转入ura3基因，培养基中加入尿苷或尿嘧啶，缺陷株生长。 5-氟乳清酸 5-氟尿嘧啶，乳清苷5-磷酸脱羧酶细胞死亡 Ti质粒（Tumor inducing plasmid）——存在于植物的土壤致癌农杆菌中，诱发植物产生冠瘿瘤的质粒。分为4种类型：

2019-09-21 约7.84千字 83页立即下载

第三章基因工程的载体讲课.ppt （一）质粒的生物学特性 ⑹ 质粒的转移???????????? ???????????????????????? （二）质粒DNA的制备有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。目前一般使用碱变性法制备质粒DNA。这个方法主要包括培养收集细菌菌体，裂解细胞，将质粒DNA与染色体DNA分开及除去蛋白质和RNA。（三）质粒载体的改造 ⑴去掉不必要的DNA区段。 ⑵减少限制酶的识别位点，一种酶只保留一个。（单一的限制性酶切位点）。 ⑶加入易于捡出的选择性标记基因。 ⑷对质粒进行安全性改造，要求质粒不能随便转移。 ⑸

2017-05-06 约3.97千字 36页立即下载

第三章基因克隆载体复习.ppt 主讲教师:任国领; 基因克隆载体概述;必备条件;3.1 质粒克隆载体;构型：;3、复制特点;（２）迁移作用：不含tra基因而含bom（oriＴ）位点的质粒，当宿主细胞存在辅助质粒mob基因产物时，即可打开oriＴ位点，非结合质粒借助接合质粒tra基因的产物而迁移入受体细胞。这种现象称～;６、显性质粒和隐蔽质粒;Col质粒（产大肠杆菌素）Ｆ质粒（引起细胞结合的育性质粒）降解毒物的降解质粒Ｔi质粒隐蔽质粒蓝藻内源质粒 ;１、能进行有效复制——复制起始位点（最好是多拷贝）复制子由复制起点、复制区、复制终点组成。是能够进行独立复制的一种遗传因子。每一个复

2018-01-27 约7.15千字 132页立即下载

基因工程课件-第三章基因的体外重组.pptx （1）在宿主细胞内能独立复制。（2）有选择性标记。; 基因工程中常用的载体有5类： ;（1）质粒（plasmid）载体 ;大肠杆菌的质粒;分子大小：1—200kb b. 编码基因：2—3个中等大小的蛋白质。如抗菌素抗性、代谢特征等，赋予细菌一些额外的特性（非必须）。 c. 形状：双链环状DNA。;开环DNA（ocDNA）OC构型；线形DNA （lDNA），L构型。;③质粒的类型;大肠杆菌接合（conjunction）;b. 非接合型质粒：;根据质粒在寄主细胞内存在的拷贝数的多少，分为两类：;分子量大，拷贝数低。; i) 具有复制起点(ORI)：这是自我增值必不

2023-05-02 约2.82千字 124页立即下载

基因工程课件6. 基因克隆载体-大容量.ppt 基因克隆载体 生物与食品工程学院酵母基因克隆载体 酵母： 1. 结构简单的真核生物 2. 培养廉价 3. 可以对外源基因表达蛋白进行加工和修饰二硫键的正确形成、羰基化酵母2μm质粒每个细胞含20~80个拷贝能在酵母细胞内自我复制含有复制起始点 ori YEp24载体构成： 2μm质粒复制起始点的2.2kb片段酵母染色体基因组URA3 基因(尿嘧啶营养缺陷基因)1.1kb片段将上述两个片段分别接入pBR322质粒的EcoR I 和 Hind III位点 YEp24载体 YEp24载体穿梭质粒：人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质

2016-11-23 约小于1千字 15页立即下载

第三章用于基因克隆的载体讲课.ppt 第三章 用于基因克隆的载体 3.5.2 噬菌粒（phagemid or phasmid）噬菌粒载体的特点：噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体能像M13-DNA那样体外包装，并高效转染受体细胞装载量比常规的M13mp系列要大很多（10 kb）能像质粒那样在受体细胞中自主复制重组操作简便，筛选容易通过克隆双链DNA能获得同等长度的单一单链DNA ?噬菌体感染细菌的早期：双链进行?型复制。 3.3.2 ?DNA的复制模型（1） ?型复制（2）滚环复制感染的晚期：启动滚环复制机制。形成多联体?DAN分子

2017-05-09 约9.46千字 117页立即下载

生物工艺学第三章基因克隆载体分析.ppt 第三章基因工程载体定义基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”。也称DNA克隆载体。必备条件 1、克隆位点(一个或多个) 2、能携带外源DNA片段进入受体细胞: 能自我复制，或整入染色体随受体细胞DNA复制而复制。 3、有选择克隆子的标记基因 4、安全性(不含损害受体的基因,不任意转入别的,尤其人的细胞) 意义：基因工程随载体系统的建立而兴起，构建新载体一直是基础研究的优先领域。按克隆载体的来源分：质粒～病毒或噬菌体～质粒与病毒或噬菌体DNA组成的～质粒与染色体DNA片段组成的～３.１质粒克隆载体 定义：以质粒DNA为基础构建而成的

2016-10-29 约1.77万字 147页立即下载

第三章__基因工程制药(中)课件.ppt （4）当aox1 基因缺失只存在aox2 时,大部分的乙醇氧化酶活力丧失,细胞利用甲醇能力降低,细胞在甲醇培养基上生长很慢,这种菌株被称为Muts (Methanol utilization slow) ; aox1 基因存在时,细胞利用甲醇能力正常,在甲醇培养基上生长较快,这种菌株表型被称为Mut + 。（5）aox1 基因的表达为转录水平调控。aox1 基因的调控是一个抑制机制加上诱导机制的过程,在以葡萄糖或甘油为碳源的培养基上生长时抑制转录,而在以甲醇为惟一生长碳源时诱导基因转录,蛋白质表达。（6)甲醇酵母生长适宜温度一般为28～30 ℃。诱导期间如果温度超过32 ℃,不利于蛋白表达

2016-08-10 约7.27千字 58页立即下载

基因工程课件-第三章 生物信息的获取.pptx 第三章 生物信息的获取;世界三大核酸序列数据库 (公共序列数据库，Public Sequence Database) GenBank（美国） EMBL(欧洲) DDBJ(日本) 序列信息等同 ;GenBank（美国国家生物技术信息中心，NCBI）美国的核酸数据库从1979年开始建设，1982年正式运行；它是由美国国立生物技术信息中心(NCBI)建立和维护的。 ;GenBank网址 /Genbank/;GDB网址 / ; AceDB 线虫基因组数据库。既是一个数据库，又是一个数据库管理系统。提供很好的图形界面，用户能够从大到整个基因组

2023-05-04 约6.27千字 61页立即下载

基因工程 基因克隆的载体-1质粒.pdf 第四章第四章 基因克隆的载体基因克隆的载体第四章第四章 基因克隆的载体基因克隆的载体第四章第四章 基因克隆的载体基因克隆的载体第四章第四章 基因克隆的载体基因克隆的载体分分基基目的基因基因载体 目的基因

2017-09-13 约3.11万字 52页立即下载

第三章 基因克隆载体 基因工程课件.pdf

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