药物检验工-12高效液相色谱法.ppt

* 二、定量分析方法——同GC（自己看） 1. 外标法：应用较为广泛 2. 内标法：内标法分为工作曲线法、内标对比法等。 内标对比法：不需知校正因子，又具有内标法的定量准确度 与进样量无关的特点，方法简便实用。 在药物分析中分析结果（含量）常用标示量％表示： §6-2 定量方法 1.定量依据 m ＝ fi · Ai fi 定量校正因子 Ai 色谱峰峰面积（信号） m1+m2+m3+…+mi+…mn （1）归一化法 试样中的成分都能出峰则有： Wi = mi m = mi ×100% 2.测量方法： * * * * 液相色谱法 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 * 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 经典液相色谱包括： 柱色谱 和 平面色谱 高效液相色谱法 HPLC 第一节 概述 high performance liquid chromatography 以气相色谱理论为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法 HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测，灵敏度差 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测，灵敏度高 二、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、热稳定性差、离子型等样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 三、高效液相色谱仪流程图 1．贮液罐 （滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 固定相和流动相 1、固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷键合硅胶 （C18，ODS柱——HPLC约80%问题） 2、流动相：流动相极性 固定相极性 底剂（水） + 与水混溶的极性调节剂 常用甲醇－水、乙腈－水等 3、分离机理：疏溶剂理论为代表(了解) 溶质的保留机理是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合。 不是溶质分子与键合相间的色散力 流动相洗脱方式 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱）——类似GC的等温度洗脱； 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 具有方法简便、重复性好、色谱柱易再生等优点。 对于成分复杂的样品，往往不能兼顾某些性质相差很大组分的分离要求 2）梯度洗脱：——类似GC的程序升温 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比