小牛肠碱性磷酸酶 生物化学实验——小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活的测定、SDS-PAGE电泳法测定蛋白质相对分子质量_图文.doc

小牛肠碱性磷酸酶 生物化学实验——小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活的测定、SDS电泳法测定蛋白质相对分子质量_图文 导读：就爱阅读网友为您分享以下“生物化学实验——小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活的测定、SDS电泳法测定蛋白质相对分子质量_图文”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92的支持! 生物化学实验报告 小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活的测定、SDS电泳法测 定蛋白质相对分子质量 摘要： 碱性磷酸酶是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，并且在较高温度下扔具有活性，本实验中通过一系列分离纯化获得碱性磷酸酶，催化底物对硝基苯磷酸二钠生成对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm光波长下有最大吸收，通过测定吸光值的变化率，可以检测测定酶活性（在特定条件下，1min内催化1μmol底物转化成产物所需要的酶量被称为一个酶活力单位）；蛋白质-考马斯亮蓝结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，所以可以利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。 SDS电泳法测定蛋白质的相对分子质量，是因为SDS可以与蛋白质形成蛋白质-SDS复合物，电泳迁移率主要取决于蛋白质的分子量大小，以推断出被测蛋白样品分子量的近似值。 关键词：碱性磷酸酶；提取；小牛肠；酶活性测定；马斯亮蓝法；蛋白质含量测定；SDS电泳法； 实验部分 1.1试剂与仪器 试剂：正丁醇，丙酮 （置于-20摄氏度冰箱保存），硫酸铵，30% 丙烯酰胺，10% 过硫酸铵，1 mol/L HAc，1 mol/L NaOH，TEMED（四甲基乙二胺），电泳缓冲液，平衡缓冲液（0.01 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，含1.0×10-3 mol/L MgCl2和1.0×10-5 mol/L ZnCl2）；底物缓冲液（1 mol/L 二乙醇胺-盐 酸缓冲液，pH 9.8，含0.5×10-3 mol/L MgCl2）；酶的底物溶液（用底物缓冲液配制15×10-3 mol/L 对硝基苯磷酸二钠溶液）；分离胶缓冲液（1.5 mol/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.8，已加入10% SDS）浓缩胶缓冲液（0.5 mol/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.8，已加入10% SDS）；上样缓冲液（100 mg SDS、2 mg溴酚蓝、2 g甘油，加0.1 mL巯基乙醇、2 mL 0.05mol/L pH 8.0 Tris-HCl，加超纯水定容至10 mL）；染色液（含0.1% 考马斯亮蓝R250，40%甲醇和10%冰酸的染色液500 mL）；脱色液（500 mL 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 mL）；电泳缓冲液（