定量PCR技术原理及其应用.pps.ppt

实时荧光定量PCR技术原理及其应用;1. 原理及其应用 2.应用ABI 7000 sybrgreen方法进行样品检测;Real-time quantitative PCR;;3. Baseline是背景曲线的一段，范围从反应开始不久荧光值开始变得稳定，直到所有反应管的荧光都将要，但是还未，超出背景4.threshold 荧光阈值荧光（Rn）超过本底时的临界数值,在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般我们将荧光域值的缺省设置是3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍5. CT （cycle of threshold ）每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数;; 利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其 中纵坐标代表起始拷贝数的对数，横坐标代表Ct值 因此，只要获得未知样品的Ct 值，即可从标准曲线 上计算出该样品的起始拷贝数。 ;;内标基因的选择;相对定量的计算方法;相对定量的计算方法;相对定量的计算方法;实时荧光定量PCR 的化学原理包括探针类和非探针类两种;SYBR Green I; SYBR Green I;TaqMan 探针; TaqMan 探针;TaqMan MGB探针 ;TaqMan MGB探针;实时荧光定量PCR 技术的应用