HBx稳定细胞株L02与HepG2的构建及其对GSK3β表达的影响的开题报告.docx

HBx稳定细胞株L02与HepG2的构建及其对GSK3β表达的影响的开题报告

1.研究背景

肝癌是一种常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率居全球前列。HBV感染是肝癌的主要危险因素之一，其中HBx是HBV基因组中一个关键的哪个基因。已有研究表明，HBx可以促进肝癌细胞生长、增殖、转移和侵袭，而且HBx还可以通过多种途径影响细胞的信号传导通路，如Wnt/β-catenin、NF-κB和Akt等。GSK3β作为Wnt/β-catenin途径的负调控因子，在研究肝癌的发生和发展过程中也起着重要作用。然而，目前对于HBx如何影响GSK3β的表达及其具体机制仍不详尽。

2.研究目的

本研究旨在构建HBx稳定表达的L02和HepG2细胞株，并研究HBx对GSK3β表达的影响及其相关的分子机制。

3.研究方法

3.1.细胞培养及共转染

将L02和HepG2细胞分别培养在含10％FBS的DMEM培养基中，同时用Lipofectamine2000共转染质粒pHBx-puro（或对照质粒pEGFP-puro）和pCMV-GFP构建HBx稳定表达细胞株。

3.2.Westernblot

用Westernblot法检测细胞株中GSK3β、p-GSK3β和HBx蛋白的表达量，以及Wnt/β-catenin通路的相关蛋白表达量。

3.3.实时荧光定量PCR

利用实时荧光定量PCR技术检测HBx和GSK3βmRNA的表达水平。

3.4.细胞增殖实验

通过MTT法和细胞克隆形成实验检测HBx细胞株和对照细胞株的增殖情况。

4.研究意义

本研究将揭示HBx对GSK3β表达的影响及其分子机制，为阐明HBx在肝癌的发生和发展中的作用提供理论基础。此外，本研究可为探索肝癌临床治疗提供新思路和方法。