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ASPP家族蛋白表达质粒的构建及其在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的角色的开题报告

一、题目及背景

题目：ASPP家族蛋白表达质粒的构建及其在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的角色

背景：ASPP家族蛋白是一类重要的细胞凋亡调控因子，其中ASPP1和ASPP2分别是PPP1R13B和TP53BP2基因编码的蛋白，它们都可以与p53结合，并增强其诱导细胞凋亡的作用。此外，ASPP1和ASPP2还可以结合于其他序列特征类似于p53的转录因子，调节其转录活性。而在ROS诱导的细胞凋亡中，则被发现ASPP1的表达增加，而ASPP2则被抑制。因此，该研究意在通过构建ASPP1和ASPP2的表达质粒，并将其转染至HepG2细胞中，以验证其在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的作用及其机制。

二、研究内容

1.构建ASPP1和ASPP2表达质粒：通过将ASPP1和ASPP2的cDNA序列克隆至表达质粒中的转录起始子区域，并在该质粒中添加荧光蛋白等标记以便于追踪。

2.鉴定表达质粒的功能：通过转染表达质粒至HepG2细胞中，并检测蛋白表达水平以及对ROS诱导的细胞凋亡的影响，以证明其正确的构建及表达。

3.探究ASPP家族蛋白在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的作用机制：通过检测不同实验组中细胞凋亡率及相关凋亡标志物的表达情况，探究ASPP1和ASPP2在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的作用机制，为深入理解其生物学功能提供直接证据。

三、研究意义

1.增加基础研究领域对ASPP家族蛋白的认识：该研究将系统性地探究ASPP家族蛋白在ROS诱导的细胞凋亡中的作用机制，为基础研究领域对其生物学功能的认识提供新思路和证据。

2.开发潜在靶向性治疗药物：通过研究ASPP家族蛋白在细胞凋亡中的调控机制，可以为开发潜在的抗癌药物提供新思路和靶点。

3.提高对抗氧化应激性疾病的认识：氧化应激在人体内在于许多疾病的发展进程中起到着重要作用，该研究能够增加我们对于氧化应激及其应对方式的认识。

四、研究方法

1.基因克隆：通过PCR扩增ASPP1和ASPP2的cDNA序列，并将其连接至表达质粒的转录起始子区域，再在表达质粒中添加标记等组分。

2.细胞培养：选取人肝癌细胞株HepG2，对于不同实验组的细胞进行5-Fluorouracil和Hydrogenperoxide的处理，并进行细胞毒性和流式细胞术等检测。

3.蛋白表达分析：通过Westernblot检测目标蛋白表达水平，探究其变化及机制。

4.细胞凋亡检测：通过流式细胞术检测不同实验组HepG2细胞的凋亡率及相关凋亡标志物表达情况，探究ASPP家族蛋白在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的作用机制。