c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其稳定转染细胞株的筛选的中期报告.docx

c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其稳定转染细胞株的筛选的中期报告 本实验旨在构建一个用于稳定转染细胞株的c-Met基因siRNA慢病毒表达载体，并选出稳定转染效果良好的细胞株。 1. 实验材料与方法 （1）材料：pLKO.1-puro-c-Met siRNA、pMD2.G、pCMV-VSV-G、HEK293T细胞、HEK293T/c-Met细胞等。 （2）方法： a.将pLKO.1-puro-c-Met siRNA质粒与pMD2.G、pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中，获得c-Met基因siRNA慢病毒表达载体。 b.用筛选药物puromycin选出稳定转染了c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的细胞株，并用Western blot检测c-Met表达水平。 2. 实验结果与分析 （1）质粒构建成功，并在HEK293T细胞中扩增出了c-Met基因siRNA慢病毒表达载体。 （2）通过筛选药物puromycin，成功选出了稳定转染了c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的HEK293T/c-Met细胞株，并用Western blot检测证实c-Met表达水平明显下降。 3. 结论 本实验成功构建了一种稳定转染c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的方法，并获得了稳定转染效果良好的细胞株。这为进一步深入研究c-Met基因的生物学功能及其相关的疾病治疗提供了一定的实验基础。