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c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其稳定转染细胞株的筛选的开题报告

一、选题背景

c-Met基因是编码胞外域、跨膜区、酪氨酸酶活性区和C末端的非受体型酪氨酸激酶（NRTK）的一种蛋白质。它在胚胎发育和成年期组织的再生增殖中扮演重要角色。具有高表达的c-Met基因也与多种癌症的发生发展相关联。因此，研究c-Met基因的功能和调控机制是癌症发生和治疗研究的关键。

RNA干扰（RNAi）是目前最常用的基因敲除技术。它可以通过siRNA干扰RNA的翻译过程，从而降低或消除目的蛋白质的表达。慢病毒载体作为一个高效的基因转染工具，已被广泛应用于RNAi的研究中。

因此，本研究旨在构建一种c-Met基因siRNA慢病毒表达载体，并通过转染细胞的方式来筛选稳定转染细胞株，以进一步研究c-Met基因的生物学功能和影响。

二、研究内容

1.构建c-Met基因siRNA慢病毒表达载体

基于c-Met基因的序列信息，设计并合成siRNA序列，将其构建入慢病毒表达载体中，获得c-Met基因siRNA慢病毒表达载体。

2.慢病毒包装与转染细胞

通过慢病毒包装系统，将c-Met基因siRNA慢病毒表达载体包装成慢病毒，并将其用于转染细胞。筛选出稳定转染细胞株。

3.稳定转染细胞株的分析

通过Westernblot和RT-PCR分析稳定转染细胞株中c-Met基因表达量的变化，评估c-Met基因siRNA慢病毒对稳定转染细胞株中c-Met基因表达的抑制情况。

三、研究意义

本研究将构建一种c-Met基因siRNA慢病毒表达载体，并通过转染细胞的方式来筛选出稳定转染细胞株，从而为研究c-Met基因的功能和调控机制提供有力的工具和平台。通过该研究，可以更加深入地了解c-Met基因在癌症发生和发展中的作用，为癌症治疗和预防提供理论依据和实验支持。