奶粉中蛋白质含量的方法--.doc

【摘要】? 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白质的含量。结果 待测溶液中蛋白质浓度在0～250 μg/ml 范围内标准曲线呈线性关系，其回归方程为：Y=301.12X-73.42，相关系数r=0.998，平均回收率为100.2%。结论 结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。 【关键词】? 奶粉；蛋白质；BCA法；三氯乙酸；三聚氰胺 A rapid and simple method of protein determination in powdered milk ??? Zhang Zhiqiao, Shen Guodong, Wang Gang ??? First Middle School of Hefei, Anhui Provincial Hospital Affiliated to Anhui Medical University, Hefei 230001??? 　　［Abstract］Objective? To explore a rapid and simple method of protein determination in powdered milk without other nitrogen-containing compound disturbance in Kjeldahl determination.Methods? Conjugated with protein precipitation with trichloroacetic acid, BCA (bicinchoninic acid) method was used. According to the positive relationship of protein content with the 570 nm absorbance, protein content was calculated in powdered milk.Results? Protein content in milk solution showed a good linear relationship at the detection ranges of 0-250 μg/ml, with regression equation: Y=301.12X-73.42 and related coefficient: 0.998, and the average recovery rate was 100.2%.Conclusion? BCA method conjugated with trichloroacetic acid is adaptable to the rapid and sensitive determination of protein in powdered milk.??? 　　［Key words］Powdered milk; Protein; BCA method; Trichloroacetic acid; Melamine ??? 蛋白质是人类最重要的营养物质之一。因此，蛋白质含量一直是食品检测中的重要指标。目前蛋白质定量方法较多, 如凯氏定氮法、紫外分光光度法和Lowry 法等。虽然凯氏定氮法目前是测定蛋白质含量的国家标准方法，但其操作繁琐费时，且蛋白质含量是通过测定氮的含量推算得来的，容易被其他含氮物质干扰（如2008年9月“问题奶粉”的出现源于有人利用凯氏定氮法的缺陷，向牛奶中添加三聚氰胺造成蛋白质含量虚高）；Lowry法和紫外分光光度法存在显色所需时间长，灵敏度低，稳定性差等缺点［1］。为弥补这些不足，本实验利用BCA（二喹啉甲酸）法结合三氯乙酸沉淀法建立一种快速简便的测定奶粉中蛋白质含量的方法。 ??????? 1? 材料与方法 　　1.1? 仪器与试剂 　　1.1.1? 仪器 　　酶标仪（型号ELX800， BIO-TEK INSTRUMENTS公司），96孔微孔板，化学分析滤纸（直径：9 cm，最大孔径：10 μm，杭州新华纸业有限公司），玻璃漏斗、烧杯等。 　　1.1.2? 试剂? 　　光明全脂速溶奶粉（黑龙江省光明松鹤乳品有限责任公司，产地：齐齐哈尔，生产日期，蒙牛学生多维高钙高锌奶粉（内蒙古伊利实业集团股份有限公司，产地：呼和浩特，生产日期，尿素（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司），三聚氰胺（化学纯，上海凌峰化学试剂有限