蛋白质含量测定.ppt

蛋白质含量的测定;引言;

目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法：

物理性质：紫外分光光度法。

化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry法等。

染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。

其他性质：荧光法。;二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反响，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法〔lowry’smethod〕。

三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用;掌握蛋白质含量测定的原理和方法

学会标准曲线的绘制

熟练使用分光光度计、紫外分光光度计。;〔一〕双缩脲法

〔二〕Lowry法

〔三〕紫外分光光度法;【实验原理】;

但必须注意，此反响并非蛋白质所特有，凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有H2N—CH＝NH-CH2-NH2等结构化合物，双缩脲反响也呈阳性。

;【实验材料】;;【实验方法】;【计算】;722型分光光度计的使用;722型分光光度计的使用;722型分光光度计的使用;722型分光光度计的使用;;本卷须知

;【思考题】

1、干扰本实验的因素有哪些？

2、是否所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱性溶液发生双缩脲反响？

3、简述蛋白质含量测定在科研及临床疾病诊断上的应用。;【实验原理】;蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈色的关系，制备标准曲线，来测定样品中的蛋白质含量。;Lowry法优点;【实验材料】;用浓度的标准牛血清白蛋白溶液〔浓度为250μg/ml〕配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。

取14支试管分成两组，编号，按下表操作;编号;标准曲线的绘制;注意事项;2、绘制出标准曲线：要求标准作图

铅笔作图、

横、纵坐标名称及单位

日期、作者、曲线名称

曲线上表达出待测样品的OD值及ug数。

3、计算：100ml血清中的蛋白质含量。

要求：写出公式、代入数据、写出结果。

;分析实验误差产生的原因

总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。;紫外分光光度法测定蛋白质浓度;【实验材料】;1.标准曲线制定：取8支试管，编号分别加0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0ml标???牛血清白蛋白溶液〔浓度为1mg/ml〕，用水补足到4ml，用光程为1cm的比色杯，测定OD280，绘标准曲线

2.样品测定;讨论