食品添加剂 普鲁兰酶（编制说明）.doc

PAGE 5 PAGE 1 《食品添加剂 普鲁兰酶制剂》安全标准编制说明 一、任务来源与项目编号、参与协作单位、简要起草过程、主要起草人及其所承担的工作 (一)任务来源与项目编号、参与协作单位 食品添加剂普鲁兰酶制剂，列入2010年食品安全国家标准制定计划项目，受卫生部政策法规司的委托，中国食品添加剂和配料协会作为主要承担单位全面负责组织该标准的制定工作，中国食品发酵工业研究院作为标准技术合作单位参与标准的制定工作。 本标准主要起草单位：山东隆大生物工程有限公司、诺维信（中国）生物技术有限公司、丹尼斯克（中国）有限公司、杰能科（中国）生物工程有限公司、中国食品发酵工业研究院。 （二）简要起草过程 1. 标准任务下达后，中国食品添加剂和配料协会及合作单位针对制定普鲁兰酶制剂国家标准的具体工作进行了认真研究，确定了总体工作方案，并组建了标准起草工作小组，中国食品发酵工业研究院牵头并执笔，山东隆大生物工程有限公司、诺维信（中国）生物技术有限公司、丹尼斯克（中国）有限公司等单位参加。成员单位吸纳了科研及国内主要生产企业等部门，能代表全国的情况。 2 2010年7～10月调查国外有关组织/机构对普鲁兰酶制剂的要求和酶活力的检测方法；征集国内有关生产商的有关技术文件和经销商/使用者对该酶制剂的要求；征集样品，比较并确定酶活试验方法；确定酶活试验方法的相关参数。在完成标准文本草稿的基础上，就产品指标，分析方法等有关内容在起草小组内部进行沟通确认，并就方法进行反复分析验证。起草小组内部意见经综合分析处理后，由中国食品发酵工业研究院于11月上旬提出标准文本（征求意见稿），于2011年1月进行行业函审。 （三）主要起草人及其所承担的工作 本标准主要起草人郭庆文、王茂霞、文焱、唐辰负责标准修订的全面组织工作，张蔚、钱娟娟、成霞、曹振宇负责标准的资料查询、实验设计、组织验证、征求意见、资料汇总、送审《标准》等。 二、与我国有关法律法规和其他标准的关系 依据《食品安全法》的相关条例， 结合食品安全国家标准的要求和规定， 形成一份完善的食品添加剂普鲁兰酶制剂质量安全标准。 三、国外相关法律、法规和标准情况的说明 非等效采用FCC和相关标准资料，由于酶制剂所需规定的指标较少，在产品指标的制定上，起草小组充分考虑产品应用多元化的需要与安全性要素的适当区分，允许不同客户出于不同的食品工艺要求而对酶活力这种可调节指标按照供需双方合同等其他文件进行约束，而标准本身只提供提示性说明的方法。对于安全性要素，本标准采用目前通用的食品级酶制剂卫生标准。 酶制剂产品的重点在于酶活力检验方法的选择上，起草小组通过大量实验，对方法进行验证。将目前国内外常用的两种方法都纳入标准中，并根据不同测定方法的选择适当调整适用参数。将直接测定还原糖的绝对法作为标准的第一法，将测定酶解后的红普鲁兰产生红色降解产物的相对法作为第二法。方法比较见表1。 表1：普鲁兰酶制剂国际标准活力测定方法比较 分析方法 Novozymes 分析方法 标准草案附录A中普鲁兰染色测定法 标准草案附录A中DNS测定法 FCC 法 方法号 eb-sm-0742 　 　 　 酶学分类 pullulan 6-glucano-hydrolase (普鲁兰 6-葡聚糖水解酶)E.C.3.2.1.41 　 　 　 单位定义 1PUN定义为能在本方法标准条件下每分钟释放1μmol葡萄糖所需要的酶量。1NPUN(X)=0.35PUN需要加入acarbose分析的样品，最终单位表示为NPUN(XD)；不需要的最终单位为NPUN(XP)。 在pH=4.5，反应温度为50 ℃ 的条件下，每单位体积反应液每分钟反应产生相当于1 μmol葡萄糖还原力的酶活力定义为一个酶活单位，单位：u/mL。 在pH=4.5，反应温度为60 ℃的条件下，每单位体积反应液每分钟反应产生相当于1 μmol葡萄糖还原力的酶活力定义为一个酶活单位，单位：u/mL。 1PUN定义为在实验条件下每分钟释放1μmol葡萄糖所需要的酶量。 方法类型 相对法 相对法 绝对法 绝对法 检测原理 酶样品与底物-红普鲁兰混合保温，内切普鲁兰酶能水解红普鲁兰中的α-1，6-糖苷键，产生红色降解产物。用乙醇沉淀未降解底物,并在510nm下测定上清夜的吸光值，测定值与样品中普鲁兰酶活性成正比。当样品中混有糖化酶时，需要加入acarbose来抑制糖化酶的活力 普鲁兰酶在一定条件下催化水解普鲁兰多糖生成葡萄糖等还原糖，3，5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原为显棕红色的氨基络合物，在一定范围内其颜色深浅与还原糖的量成正比，故可以在550nm的波长下进行比色，得到产生还原糖的量，计算出酶活力。 普鲁兰酶在40℃，pH5.0条件下，30min内水解普鲁兰，再用Nelson-S