低聚木糖测定〔高效液相色谱测定方法〕.doc

五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法) 本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定 本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。 （一） 方法提要 试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。 （二） 仪器 1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。 2. 超声清洗仪。 3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。 4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。 （三）试剂 1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。 2. 乙酸锌溶液： 称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。 3. 亚铁氰化钾溶液： 称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。 4. 木二糖对照品，Wako公司 (纯度≥90%)。 5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL容量瓶中，即得木二糖标准溶液。 （四）测定步骤 1. 样品处理： ①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。 ②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。 2. 标准工作曲线制作。精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。 3．色谱条件 ①色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱 250 mm i.d.×4.60mm, 5μm； ②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)； ③流速：1.0mL/min； ④柱温：35℃； ⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力 3.5Bar； 4. 样品测定。取样品滤液10μL进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。 （五） 结果计算 根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中山梨醇含量，计算出样品中的含量。 试样中木二糖含量按下式进行计算。 X= 式中： X——试样中低聚木糖（以木二糖计）含量，单位为克每一百克（毫升）（g/100g或g/100 mL）； c——样液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/ mL）； V——样品的定容体积，单位为毫升（mL）； m——样品的取样量，单位为克（g）； 计算结果保留三位有效数字。 （六） 注释 1. 低聚木糖是由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结合而成的功能性聚合糖。与通常人们所用的大豆低聚糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖等相比具有独特的优势，它可以选择性地促进肠道双歧杆菌的增殖活性其双歧因子功能是其它聚合糖类的10-20倍。木二糖是C10H18O9。它为白色粉末常温下易溶于水。中华人民共和国卫生部保健食品检验与评价技术规范 2003年版中华人民共和国卫生部2003．291-293. 2