DB22T 1252-2011 粮谷中黄曲霉毒素的快速测定方法超高效液相色谱法　.docx

ICS67.050

X04DB22

吉林省地方标准

DB22/T1252—2011

粮谷中黄曲霉毒素的快速测定方法超高效液相色谱法

Determinationofaflatoxinsingrainbyultrahigh-performanceliquidchromatography

2011-12-15发布2011-12-31实施吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T1252—2011

前言

本标准编写的格式、结构和内容均按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草。

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由吉林省粮食局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省粮油科学研究设计院、国家粮食局科学研究院。

本标准主要起草人：朱铁军、王松雪、谢刚、孟凡刚、矫珑、王曼、李莉、张艳、张忠杰、曹阳、薛恩儒。

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DB22/T1252—2011

粮谷中黄曲霉毒素的测定超高效液相色谱法

1范围

本标准规定了粮食中黄曲霉毒素含量的免疫亲和层析净化超高效液相色谱法测定方法。本标准适用于小麦、玉米、花生、大米中黄曲霉毒素含量的测定。

本标准的方法检出限：黄曲霉毒素B?、G?的检出限为0.3μg/kg,黄曲霉毒素B?、G?的检出限为0.08μg/kg。

2规范性引用文件

本标准中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱净化，此抗体对黄曲霉毒素B、B?、G、G?具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的超高效液相色谱仪测定，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中一级水的要求。

4.1甲醇(CH30H):色谱纯。

4.2苯：色谱纯。

4.3乙腈：色谱纯。

4.4氯化钠(NaCl)。

4.5甲醇-水(45+55):取45mL甲醇加55mL水。

4.6苯-乙腈(98+2):取2mL乙腈加98mL苯。

4.7甲醇-水(7+3):取70mL甲醇加30mL水。

4.8黄曲霉毒素标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2):纯度≥99%。

4.9黄曲霉毒素标准贮备溶液：用苯-乙腈(98+2)溶液或甲醇溶液分别配制0.100mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准贮备液，保存于4℃备用。

4.10黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品储备溶液，50℃下，氮气吹干仪吹干，用适量的甲醇-水(4.5)定容为混合标准工作液：黄曲霉毒素B1、B2、G1、

G2的浓度均为0.500μg/L、1.000μg/L、2.000μg/L、5.000μg/L、10.00μg/L、20.00μg/L,避光4℃可

保存7d。

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DB22/T1252—2011

4.11玻璃纤维滤纸：直径11cm,孔径1.5μm。

4.12玻璃注射器：10mL或20mL。

4.13黄曲霉毒素免疫亲和柱。

4.14滤膜：0.22μm孔径，聚砜膜或相当者。

4.15玻璃试管：无荧光特性。

5仪器和设备

5.1天平：感量0.001g。

5.2超高效液相色谱仪：配有荧光检测器。

5.3高速万能粉碎机：转速10000r/min。

5.4高速均质器：转速大于10000r/min。

5.5试验筛：1mm孔径。

5.6空气压力泵。

5.7氮气吹干仪。

6分析步骤

6.1试样的制备与提取

将粮谷样品用高速万能粉碎机(5.3)磨细，并通过试验筛(5.5),不要磨成粉末。

准确称取经过磨碎(粒度小于1mm)的试样25g(精确到0.01g)于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠，准确加入125mL(V?)甲醇-水(7+3),混匀，转移至均质器中高速搅拌提取2min。定量滤纸