DB22T 1253-2011 粮谷中赭曲霉毒素A的快速测定方法超高效液相色谱法.docx
ICS67.050
X04DB22
吉林省地方标准
DB22/T1253—2011
粮谷中赭曲霉毒素A的快速测定方法超高效液相色谱法
DeterminationofochratoxinAingrainsbyultrahigh-performanceliquidchromatography
2011-12-15发布2011-12-31实施吉林省质量技术监督局发布
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DB22/T1253—2011
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由吉林省粮食局提出并归口。
本标准起草单位：吉林省粮油科学研究设计院、国家粮食局科学研究院。
本标准主要起草人：朱铁军、王松雪、谢刚、孟凡刚、矫珑、王曼、李莉、张艳、张忠杰、曹阳、薛恩儒。
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DB22/T1253—2011
粮谷中赭曲霉毒素A的快速测定方法超高效液相色谱法
1范围
本标准规定了粮食中赭曲霉毒素A含量的免疫亲和柱层析净化超高效液相色谱法测定的方法。
本标准适用于粮食(小麦、玉米、稻谷)中赭曲霉毒素A的测定。本标准方法检出限0.5μg/kg。
2规范性引用文件
本标准中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A,经免疫亲和柱层析净化后，以甲醇洗脱，洗脱液用带有荧光检测器的超高效液相色谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中一级用水要求。
4.1甲醇：色谱纯。
4.2聚乙二醇(PolyethyleneGlycol,分子量8000)。
4.3氯化钠。
4.4乙酸：色谱纯或相当者。
4.5磷酸氢二钠。
4.6磷酸二氢钾。
4.7氯化钾。
4.8浓盐酸。
4.9乙腈：色谱纯。
4.10甲醇—水(8+2):取80mL甲醇(4.1)加20mL水。
4.11磷酸缓冲溶液(PBS):称取8.0g氯化钠(4.3)、1.2g磷酸氢二钠(4.5)、0.2g磷酸二氢钾(4.6)和0.2g氯化钾(4.7)溶解于约900mL水中，用浓盐酸(4.8)调节pH至7.0,用水稀释
至1L。
4.12赭曲霉毒素A标准品：纯度大于99%。
4.13赭曲霉毒素A标准储备溶液：用甲醇(4.1)配制0.100mg/mL的赭曲霉毒素A标准储备液，保存于4℃冰箱备用。
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DB22/T1253—2011
4.14赭曲霉毒素A标准工作溶液：准确移取适量的赭曲霉毒素A标准储备液(4.13),用甲醇(4.1)稀释成标准工作溶液。配制标准液浓度为：0.5μg/L、lμg/L、2μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L。
4.15赭曲霉毒素A免疫亲和柱。
4.16槽纹折叠滤纸，无荧光特性。
4.17玻璃纤维滤纸：直径11cm,孔径1.5μm,无荧光特性。
4.18玻璃试管：无荧光特性。
4.19滤膜：0.22μm孔径，聚砜膜或相当者。
4.20玻璃注射器：10mL或20mL。
5仪器和设备
5.1天平：感量0.001g。
5.2超高效液相色谱仪：配有荧光检测器。
5.3高速万能粉碎机：转速10000r/min。
5.4高速均质器：转速大于10000r/min。
5.5试验筛：1mm孔径。
5.6空气压力泵。
5.7氮气吹干仪。
6分析步骤
6.1试样的制备与提取
将粮食样品用高速万能粉碎机(5.3)磨细，并通过试验筛(5.5),不要磨成粉末。
准确称取经过磨碎(粒度小于1mm)的试样50g(m,精确到0.01g)于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠，5.0g聚乙二醇(4.2),加入100mL甲醇+水(8+2)(V?)。混匀，转移至均质器中高速搅拌提取2min。静置，提取液经槽纹折叠滤纸过滤于干净的烧杯中，准确移取1