紫外及可见吸收光谱法.ppt

*************************************************************************************************************************722型分光光度计光学系统图1.光源；2.滤光片；3,8聚光镜4,7.狭缝；5.准直镜；6.光栅9.比色池；10.光电管第96页,共106页，2024年2月25日，星期天*国产751型分光光度计是紫外、可见和近红外分光光度计，适用波长范围为200~1000nm。氢灯和钨灯作为辐射源，分别在200~320nm和320~1000nm范围测量使用．Link第97页,共106页，2024年2月25日，星期天*2.双光束分光光度计Link第98页,共106页，2024年2月25日，星期天*双光束分光光度计的优点双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。双光束仪器由于样品溶液与溶剂的对比几乎是同时进行的，光源和检测系统的漂移可以得到一些补偿．由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。第99页,共106页，2024年2月25日，星期天*3.双波长分光光度计这种仪器是将一共同光源发出的辐射通过一特制的单色器，此单色器内设有两个可以单独调节的光栅，经光栅色散后，两种波长的辐射交替通过切光器，又重新合并成同一光束，经过试液后到达光电倍增管，仪器配有一个同步开关装置以区别接通相应于各光束的电信号，经过仪器内的电子学单元装置可测量两种波长的吸光度差值?A，其方框图如图3-28所示。第100页,共106页，2024年2月25日，星期天*根据两波长λ1和λ2处吸光度差值?A与吸光物质浓度c的关系进行分析的。Link第101页,共106页，2024年2月25日，星期天*工作原理调节仪器使两者入射光强度相同第102页,共106页，2024年2月25日，星期天*即在两波长处吸光度差?A与物质浓度c成正比。第103页,共106页，2024年2月25日，星期天*对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。只用一个吸收池，消除了吸收池的差异带来的影响；适用于混浊液的分析。第104页,共106页，2024年2月25日，星期天*双波长混合物测定原理右图中，B是待测组分，A是共存组分．B浓度与吸光度差值成正比．第105页,共106页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第106页,共106页，2024年2月25日，星期天*******************************************注意：棱镜单色器色散具有非线性的特征．玻璃和石英对于紫外辐射都有较大的色散率，而对可见辐射具有较小的色散率，其中较好的是玻璃，因此可见分光光度计都使用玻璃棱镜，但玻璃对于紫外辐射有显著的吸收，所以紫外-可见分光光度计采用石英棱镜作为整个光谱区的色散元件。第64页,共106页，2024年2月25日，星期天*（2）光栅的色散分为透射光栅和反射光栅（用的较多）第65页,共106页，2024年2月25日，星期天*光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，具有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存和易于制备等优点。缺点是各级光谱会重叠而产生干扰。第66页,共106页，2024年2月25日，星期天*光束1与光束2的光路之差为（AB–CD），要发生干涉，必须mλ＝(AB–CD)AB=dsini式中d是刻线间的距离，称为光栅常数；i是入射光与法线间的夹角。第67页,共106页，2024年2月25日，星期天*CD＝–dsin?式中?是衍射角，负号则表示入射光和反射光在法线异侧，如果二者在法线同侧，则取正号。因此发生干涉的条件是mλ＝d（sini±sin?）(3-6)第68页,共106页，2024年2月25日，星期天*m是谱线的级数，该式说明对于某一给定的衍射