高密度培养方法.ppt

凝结芽孢杆菌高密度培养及高产芽孢的方法研究 凝结芽孢杆菌，属于肠道的、安全的乳酸菌，兼性厌氧，最适生长温度为45—50℃，最适pH为6.6—7.0。 一.高密度培养 尽可能高的提高培养基中菌的浓度 1.培养基优化 目的：找出实验室条件下，最适的培养基组成及培养条件 ⑴单因素实验 目的：找出可能影响菌体生长的因素 考虑的因素有如下几个： ①碳源(能源) ②氮源 ③无机盐(微量元素) ④微营养物如维生素、脂肪酸等 ⑤pH ⑥温度 方法：以文献中的培养基组成为基础，分别以上述六个因素为变量，其他五个因素不变做六组实验，每组平行三次，适温摇床震荡培养48h，倒平板，计算菌数，取平均值，作图。 预期结果：菌数随变量，呈现抛物线变化 ⑵正交实验 目的：确定最适的培养基配比 方法：单因素实验确定的影响因素，确定相应的水平。 预期结果：找到影响菌体生长的显著性因素，及配比。 2.发酵罐分批补料培养 目的：发酵罐条件下，尽可能大的积累菌体数量 方法：培养基及培养条件：以前两步实验确定的培养基组成及其配比配制培养基，设定相应条件。 ⑴做单因素实验，考虑因素：转速、冷却水流量、氧分压 ⑵正交实验，确定最适合最稳定的发酵条件 ⑶确定开始补料的时间 目的：延长菌体的对数期，积累菌体数量 方法：每隔一段时间，从发酵罐中取一定量菌液，稀释合适的倍数，分装两管，一管倾倒平板，另一管，灭活菌体后，倾倒平板。分别计数，求差值，求得所取菌液中的菌体含量。作图。 预期结果：确定对数期和稳定期，对数期后期即可开始补料。 ⑷补料液流速 不同的发酵罐以不同的流速同时补料，持续一段时间，取菌液，方法如（3）。 二.高产芽孢 目的：产生高密度的芽孢 方法：凝结芽孢杆菌是在缺乏营养的 环境中产生芽孢，因此为了得到更多的芽孢，要在菌液达到一定浓度时，降低营养成分，如：降低补料液流速。制造恶劣环境，使其产生芽孢。 谢谢