植物次生代谢产物生物碱的测定 液相色谱质谱法征求意见稿.docx

ICS FORMTEXT 01.040.11 FORMTEXT 中华人民共和国国家标准 GB/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXX FORMTEXT FORMTEXT 植物次生代谢产物生物碱测定 液相色谱质谱法 FORMTEXT Determination of 11 alkaloids in biological human samples FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 GB/T XXXXX—2017 PAGE 5 植物次生代谢产物生物碱测定 液相色谱质谱法 范围 本标准规定了植物组织、动物组织、体液（血液、尿液）中东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素含量的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、允许差等内容。 本标准适用于植物组织、动物组织、体液（血液、尿液）中东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素含量的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3试验方法 样品经提取液超声提取、离心后，用液相色谱串联质谱法测定和确证，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3 10%乙腈溶液：10mL乙腈+90mL去离子水，混匀。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 0.1%甲酸水溶液：准确移取甲酸（4.4）1.0mL置于1L容量瓶中，用水定容至刻度。 4.6 1%甲酸的乙腈溶液：1mL甲酸（4.4）+ 99 mL乙腈（4.2），混匀。 4.7 无水硫酸镁：分析纯。 4.8 乙酸铵：色谱纯。 4.9 氨水：色谱纯。 4.10 100mM乙酸铵溶液：称取乙酸铵（4.8）3.854g，用去离子水溶解，定容至500mL。 4.11 乙酸铵-氨水缓冲液（pH≈9）：取100mL 100mM乙酸铵溶液（4.10），用氨水（4.9)调pH值到9±0.5。 4.12标准物质：东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及结构式参见附录A表A.1，纯度均不小于96%。 4.13混合标准储备溶液：准确称取适量各标准物质（4.12）分别置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液（于4℃避光保存，有效期2个月）。分别准确移取东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素标准储备溶液1mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素浓度为1mg/L的混合标准储备溶液，于4℃避光保存，可使用一周。 4.14微孔滤膜：0.22 μm，有机相。 5 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2电子天平：感量为0.0001g和0.01g。 5.3离心机：转速不低于9500r/min。 5.4超声波清洗仪。 5.5 氮吹仪：带水浴，温度可调。 5.6涡旋混合器。 5.7 粉碎机。 5.8离心管：10mL。 5.9离心管：50mL。 6 分析步骤 6.1 试样制备 植物组织、动物组织样品用粉碎机粉碎均匀。 6.2 试样提取 6.2.1植物组织、动物组织 称取植物组织样品1g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加入5mL去离子水，涡旋混合2min，加入10mL乙腈（4.2），涡旋混合1min，超声辅助提取10min，加入4g无水硫酸镁（4.7），迅速振摇1min，9500 rpm离心5min。取上清液5mL在45℃水浴中氮吹浓缩至干，用1mL 10%乙腈溶液（4.3）复溶，过微孔滤膜（4.14），待测定。 6.2.2 体液 血液 取血液试样0.5mL于10 mL离心管中，加入1 mL乙酸铵-氨水缓冲溶液（4.11），涡旋混