AM-AM-FS-Is-0211奶-蛋白质含量的测定-Amidoblackdye酰胺黑染料-联合方法（常规方法）.doc

AMAMFSIs0211奶蛋白质酰胺黑染料光谱法

AMAMFSIs0211

奶－蛋白质含量的测定－Amidoblackdye酰胺黑染料

－联合方法（常规方法）

1适用范围

本方法适用于生奶或经过热处理的奶或经过机械加工的奶（如经过巴氏消毒、消毒的、搅匀的、或再造奶），半脱脂奶以及脱脂奶。本方法还适用于含0.07至0.1％(m/m)HgCl2防腐剂的奶，以及含0.02至0.3%(m/m)叠氮化钠防腐剂的奶。对于含0.1%(m/m)重铬酸钾防腐剂的奶，只有当酰胺黑溶液加入奶中至光谱仪一切就绪这一瞬间，此方法才适用。此方法不适用于含甲醛防腐剂的奶。

2原理概要

将pH=2.4缓冲的酰胺黑溶液添加到待测液中，形成不溶的着色剂－蛋白质络合物，采用离心法（或过滤法），除去不溶物。通过测量溶液中过量染料的吸收来测定蛋白质含量。

3仪器和试剂

3.1仪器

试管或离心试管，配橡皮塞

支架

±0.003mL；20±

机械振荡器

离心机或过滤装置

pH计

容量瓶100mL；1000mL；2000mL；3000mL

分析天平（）

3.2试剂

酰胺黑10B着色剂水含量＜5%(m/m)

标准酰胺黑溶液（配制时需加磷酸氢钠和柠檬酸）

4方法概述

采样：

按ISO707

将试样瓶置于水浴中调节样品温度20~30℃，振摇混合使其彻底分散开。可通过适当提高水浴温度或加入合适的分散剂以实现目的。而后将水浴温度调至20℃。

4.3光谱法测定

将1ml测试样加20ml酰胺黑标准溶液，混合30秒，然后样品进行离心或过滤，取上层清液，测其吸光度（amidoblack标准配比溶液的吸光度定为0）。

绘制标准蛋白质吸光曲线（蛋白质含量2.54.5%m/m）

5结果表示和重复性

由标准蛋白质吸光曲线推断试样中蛋白质含量。

每100g试样中，其实验误差应在0.03g以内。

特例：当试样中蛋白质含量较高时，添加一定量的已知蛋白质含量的奶制品。其蛋白质含量w1：

w1=2w2w3

w2：混合物蛋白质含量

w3：标准溶液蛋白质含量

6来源

国际标准化组织：ISO5542