AM-AM-FS-Is-0292油菜籽-叶绿素含量的测定-光谱法.doc

AMAMFSIs0292油菜籽叶绿素光谱法

AMAMFSIs0292

油菜籽——叶绿素含量的测定——光谱法

1.适用范围：

本方法采用光谱法，适用于油菜籽中叶绿素含量的测定。该方法不能用于测定油中的叶绿素含量。

2.原理概要：

在特定的装置中用特定的萃取溶剂对试样进行萃取，再用光谱法认取液中的叶绿素含量。

3.主要仪器和试剂：

3.1.仪器

常规实验室仪器，主要有：分析天平(精确到0.001g)、机械磨、微型机械磨(见图1)、滤纸、分光光度计（光谱带宽2nm），比色皿（1cm）、移液管(30ml，ISOA类要求)、带盖试管。

3.2.试剂

除非另作说明，试剂要用分析纯。主要试剂为萃取溶剂[向500ml烧杯中加入100ml无水乙醇，再加入300ml无水异辛烷(2,2,5三甲基戊烷)或无水工业正庚烷或无水石油醚(基本上是含有7个碳的烃，沸点范围为90℃～100℃)。

4.过程简述：

4.1采样

取样可参照ISO664。重要的一点是取样应具有代表性，样品在运输或储存时未被破坏或改变。

4.2样品制备

试样去除杂质后，可按ISO664进行制样。

含水量超过10％(m/m)的试样要进行烘干，使含水量降到10％(m/m)或更低，以降低破坏叶绿素的危险。

移取50g试样至机械磨中，以制得均匀的粉末状油菜籽。如果用小型磨，如咖啡磨，每次可磨10g，分5次磨完，而后将其合并后混匀。

4.3测试

称取约2g试样，精确到0.001g，放入不锈钢管或球磨型萃取罐中。用移液管加入30ml萃取溶剂，如果用不锈钢管，向其中加入3个不锈钢球，摇荡3h。如用球磨，加入至少4个中等尺寸的钢球，萃取20min。

萃取物放置10min，然后通过滤纸过滤到试管中，转移至比色皿中，尽快盖好盖子以免挥发。

滤液移入比色皿中，并用分光光度计测定其在655nm，705nm和625nm下的吸收。

按公式计算叶绿素含量。

5.精确度：

重复性和再现性

参数

试样

A

B

C

D

E

F

H

I

J

平均值

参加的实验室数

16

16

16

16

16

16

16

16

16

排除的实验数

1

1

1

1

1

1

1

1

4

平均值(mg/kg)

重复性的标准偏差，Sr,mg/kg

再现性的标准偏差，SR,mg/kg

重复性的变化系数,%

再现性的变化系数,%

重复性限(r),mg/kg

再现性限(r),mg/kg

重复性(r),％

再现性(R),％

21

试样A～E为1992年测定；试样F～H为1990年测定。

A：25mg/kg叶绿素D：50mg/kg叶绿素H：10mg/kg叶绿素

B：30mg/kg叶绿素E：75mg/kg叶绿素I：20mg/kg叶绿素

C：40mg/kg叶绿素F：80mg/kg叶绿素J：30mg/kg叶绿素

6.来源：

国际标准化组织，ISO10519：1997(E)