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AMAMFSIs0214干奶硝酸盐含量镉还原光度测定法(筛选法)

AMAMFSIs0214

干奶——硝酸盐含量的测定——镉还原光度测定法(筛选法)

1.适用范围

本方法适用于测定干奶中硝酸盐的含量。

2.原理概要

将干奶溶于水中，沉淀出脂肪和蛋白质，并过滤。利用锌粉和镉离子将滤液中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，与生色剂形成红色溶液。在波长为538nm时，测量溶液的吸光值。

3.仪器和试剂

3.1仪器

所有玻璃器皿都必须彻底清洗干净，并用蒸馏水淋洗以确保不含硝酸盐。

分光光度仪(能测出波长在538nm的吸收，配有光路长为14cm的吸收池)

离心机(能产生200g的线速度)

离心试管

磁力搅拌器

滤纸(中速，直径15cm，不含硝酸盐和亚硝酸盐)

锥形瓶(500mL)

容量瓶(100mL，1000mL，符合ISO1042B级要求)

移液管(符合ISO648A级或ISO835/1要求)

3.2试剂

所有试剂都是分析纯的，水必须是不含硝酸盐和亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。

◆沉淀蛋白质和脂肪的溶液

硫酸锌溶液267.5gZnSo4·7H2O/500mLH2O

K4[Fe(CN)6]·3H2O溶液86g/500mLH2O

(CH3Coo)2Cd·2H2O+1mL醋酸)/100mLH2O

锌悬浊液(在用之前，将10mL水和2g锌粉加入到一个小烧杯中，加磁力搅拌使锌粉处于悬浊状态。)

生色溶液

溶液I

将450mL浓盐酸(ρ20=1.19g/mL)稀释至1000mL。

溶液II

2C6H4SO2NH2溶于75mL水和5mL浓盐酸中，冷却至室温后，加水稀释至100mL。如需要请过滤。

溶液III

将0.1gC10H7NHCH2CH2NH2·2H2CL溶于水中，并加水稀释至100mL。如需要请过滤。溶液III置于密闭棕色瓶中于冰箱中存放1周。

3标准溶液

KNO3/L

μgNO3。

◆缓冲溶液pH9.69.7，取17ml浓H2SO4至1000ml容量瓶中，加水至约600ml，冷却至室温并摇匀，加入100ml浓氨水（约含25%NH3），衡释定容，如果必要，调节PH值至9。

◆硅酮消泡剂

4.方法概要

4.1制样

ISO707

4.2测试样品的制备

将干奶转移至两倍于其体积的带塞的容器中，立即塞上塞子。充分混匀。

4.3工作曲线

分别称取10g（准确至0.01g）几乎不含硝酸盐和亚硝酸盐干燥后的脱脂奶于5个500mL锥形瓶中。分别向其中加入136，131，126，121，116mL温水(5055℃)，充分溶解dried脱脂奶。向瓶中加入0.1mL硅酮消泡剂。然后分别移取0，5，10，15和20mL硝酸钾标准溶液于上述5个锥形瓶中。测量滤液的吸光值。未加标液的吸光值定为0。

4.4萃取和脱除蛋白质

缓慢向10g被测试样中加入136mL温水(5055℃)，混匀。加入0.1mL硅酮消泡剂。然后依次加入12mL硫酸锌溶液，12mLK4[Fe(CN)6]·3H2O溶液。每加入一种溶液之后充分混匀。再加入40mL缓冲溶液，充分搅匀后过滤。

注：将溶液停放一段时间后过滤，保证滤液澄清。

4.5硝酸盐还原为亚硝酸盐

吸取20mL滤液于离心试管，加入0.5mL醋酸镉溶液，混匀。加入约0.5mL锌粉悬浊液，立即旋转并翻转试管5min，但需避免其与空气接触。如需要，离心5min。移取10mL上层清液于100ml容量瓶中，向其中加入5mL溶液I和5mL溶液II，仔细混合后在室温下放置5min，避免阳光直射。而后加入2mL溶液III，小心混合后，在室温下放置5min，避免阳光直射加水稀释至刻度，混匀。

在波长为538nm时，于15min内测量溶液的吸光值，需要进行空白实验。如果吸光值大于1.5，稀释滤液，重新测量。

5.精密度

如果硝酸盐含量小于30mg/kg，在短时间间隔内同一操作者两次平行实验误差不应超过6mg/kg。

如果硝酸盐含量大于等于30mg/kg，同一操作者两次平行实验误差不应超过两次实验结果算术平均值的20%。

6.来源

国际标准化组织：ISO8151