基因治疗(详细分析：基因)共97张课件.pptx

第九章基因治疗;基因治疗分类;1973年第一例人体实验

1978年第二例基因治疗实验

基因治疗动物实验广泛开展

DrAnderson（1980）首先阐明基因治疗前景和发展方向

Rosenberg（1990）利用逆转录病毒将基因导入肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），并将TIF输回体内，TIF集中在肿瘤部位，表达neoR。;;

;（一）基因置换（genereplacement）;又称为基因打靶(genetargeting）

定点整合的条件:转导基因的载体与染色体上的DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换，使基因置换这一治疗策略得以实现。;要实现基因置换，需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。;基因置换必要条件：;（二）基因添加;基因干预(geneinterference)

指采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因而使之不表达，以达到治疗疾病的目的。;（四）自杀基因治疗

自杀基因治疗:恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。

原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。;自杀基因的作用机制;?TK/GCV单纯疱疹病毒（herpssimplexvirus,HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidinekinase,tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，导致细胞死亡。;旁观者效应:“自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。

;（五）基因免疫治疗;二、基因治疗的必要条件;

外源基因可有效导入靶细胞

外源基因能在靶细胞中长期稳定存留

导入基因能适量表达

导入基因的方法及载体对宿主细胞安全无害;二、基因转移技术;基因治疗的两种途径;基因治疗途径;基因转移(genetransfer)技术：;1.病毒介导的基因转移系统;Retrovirus;外源基因能在靶细胞中长期稳定存留

是先从患者体内取出某一器官组织的???胞，体外扩增后，将目的基因转入靶细胞形成表达外源基因的遗传修饰细胞，选择高表达的细胞扩增培养，以一定数量移植患者体内。

3、导入基因能在靶细胞中长期稳定存在

病毒介导的基因转移系统

受体介导转移技术示意图

离体细胞经转染和一定时间培养后再植回体内，仍较易成活

必须是单基因遗传病，而且属隐性遗传；

脂质体介导进入靶细胞内，易被单核-吞噬细胞系统选择性吞噬、降解。

导入的基因不需整合即可表达，避免了逆转录病毒载体导入整合后，一旦发生副作用不易中止或逆转的缺点；

病毒感染人体后不仅可能急性发病，还可以在人体内长期潜伏，造成终身伤害。

该复合体可识别与siRNA有同源序列的mRNA，并在特异的位点将该mRNA切断。

例如，酪氨酸酶是皮肤细胞和黑色素瘤细胞产生色素途径中的一种酶，可利用其启动子驱动治疗基因只在黑色素瘤细胞中表达，而不在正常的周边细胞中表达。

通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。

维持免疫系统功能

（1）小干扰性RNA（siRNA）

ASGP-PL反义RNA复合物可以专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别，并吞噬到肝细胞中，反义RNA进入肝细胞后，可被逐渐释放出来发挥作用。;用siRNA抑制人类免疫缺陷病毒（HIV）某些基因的表达，如P24、Vif、nef、tat或rev，阻碍HIV在细胞内复制。

（2）干扰病毒基因组的转录起始和调控。

体外试验和动物试验

RNA干扰技术可用于治疗有异常基因表达的恶性肿瘤。

（1）抑制病毒与宿主细胞结合：即阻断病毒表面抗原决定簇与宿主细胞受体间的特异性结合。

（1）小干扰性RNA（siRNA）

要实现基因置换，需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。

是先从患者体内取出某一器官组织的细胞，体外扩增后，将目的基因转入靶细胞形成表达外源基因的遗传修饰细胞，选择高表达的细胞扩增培养，以一定数量移植患者体内。

3、导入基因能在靶细胞中长期稳定存在

核酶：裂解特异的靶mRNA

●产生子代病毒并释放，又感染新的细胞，建立新的潜伏状态。

（2）构建能转录反义RNA的重组质粒，将质粒转入细胞，转录出反义R