CTAB法提取真菌基因组DNA.pdf
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CTAB 法提取真菌（霉菌、酵母）基因组 DNA--试剂配制方法及操作步骤
一、试剂配制
（一）2%CTABB 中液：
1、 各试剂终浓度：
CTAB 粉末——20g/L
即 10X TE
（ Tris-HCl PH
8.0——100 mmol/L
EDTA PH
8.0——20 mmol/L }
NaC ——
1.4mol/L
2、 配制方法：
（1） 配制 1L: 20gCTAB+100mlTris-HCt 液（1m/L） +40mlEDTA 母液（
）
0.5m/L +
81.816gNaC 定容至 1L。
（ ）
（2 ） 配制 100ml: 2gCTAB+10mlTris-HC©液 1m/L +4mlEDTA 母液（
）
0.5m/L +
8.1816gNaC 定容至 100m 。
（3 ） 配置 1X TE100ml10ml Tris-HC 母液（1m/L） + 4ml EDT 如液（
0.5m/L ）
（二） 筑基乙醇
分装1ml 于离心管中，2%CTAE^冲液与筑基乙醇以50:1 体积混合。
（三） Tris-苯酚、氯仿、异戊醇
1、 各试剂浓度：
苯酚/氯仿/异戊醇（25: 24: 1 ）
2、 配制方法：
（
Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇 24: 1）混合均匀，即，移入棕色玻
璃瓶中4C 保存。
（四） NaAc 和 Nacl
1、 浓度：3mol/L
2、 配制方法：
（1） 3MNaAc10ml:
称取
2.46gNaAq pH
4.0，用 H2O 定容到10ml; （称量
40.8gNaOAc.H2C®于烧杯中，加入冰醋酸调节 pH 到
5.2,定容到 100ml）;
（2 ） 5M NaCl 100ml:
称取
29.22g NaCl 用 H2 。定容到 100ml 称取
292.2gNaCl 置于1L 烧杯中，加入约800 ml 的去离子水后搅拌溶解加去离子水
将溶液定容到1L 后，适量分成小份高温高压灭菌后，4C 保存。
二、试验准备
（一）
1、周压
1.5ml 无核酸酶离心管Xn 个样品、2ml、5ml 离心管；
2、高压超纯水500ml （去离子水）用于试剂配制；
3、枪头 10 小 200 小 1000U；
（二）
1、筑基乙醇10 U X 企样品，分装于2ml 管；
2、Tris-苯酚500 X 命样品，分装于5ml 管；
3、氯仿480 M X 企样品，分装于5ml 管；
4、异戊醇20 U X 企样品，分装于5ml 管；
5、70%乙醇
1.2ml X 个样品，分装于5ml 管；
6、水浴锅65C 预热、37C 预热；
7、NaAc150U X 企样品，分装于5ml 管；
8、-20 C 预冷无水乙醇
，
1.1ml X 个样（或异丙醇） 800U X 企样品、氯仿异戊醇（24:1 ） 500X 命 样
品；
（
9、RaseA 酶 10mg/ml）解冻；
二、试验步骤
1、2%CTA 累解液500 U X 企样品，放于65C 水浴锅中预热；
2、真菌悬液离心得到大约100mg 真菌组织于
2.0 mL 离心管；
3、10 M X 命样品筑基乙醇加到预热的 2%CTAE®解液中；
4、每个样品中加510 U CTAB 和筑基乙醇混合液，100mg 玻璃珠，旋涡震荡研
磨裂解30min 或以上（裂解一定要彻底）；
5、放入65C 水浴锅中，保温30~60min,期间轻摇数次（一般20min 左右一次，
刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔）。
6、加入5--10^1 （试剂盒
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