如皋黄鸡CEBPA基因克隆、生物信息学分析及表达载体构建.docx
如皋黄鸡CEBPA基因克隆、生物信息学分析及表达载体构建
目录
一、项目背景及研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2
项目背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2
研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
二、实验材料及方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.1如皋黄鸡样本采集．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2其他实验试剂与工具．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
2.1CEBPA基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
2.2生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
2.3表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
三、CEBPA基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
基因序列获取及分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
1.1基因组DNA提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
1.2CEBPA基因序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
1.3引物设计及合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
PCR扩增及产物鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.1PCR扩增反应体系建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
2.2扩增产物电泳检测及纯化回收．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
四、生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
序列比对及多态性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
1.1与已知序列比对．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
1.2多态性位点分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
进化树构建及遗传分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
2.1进化树构建方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.2遗传多样性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
五、表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
表达载体选择及改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
1.1表达载体介绍及选择依据．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
1.2载体改造及酶切位点设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
重组表达载体构建及鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.1重组表达载体构建流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.2重组子鉴定及序列分析验证表达载体正确性．．．．．．．．．．．．．．．．38
一、项目背景及研究目的
如皋黄鸡是中国著名的优良地方鸡种之一，以其肉质鲜美、营养价值高而闻名。为了深入理解如皋黄鸡的遗传特性及其与健康和肉质品质相关的基因表达机制，本研究旨在通过CEBPA基因的克隆、生物信息学分析以及构建表达载体，以期为如皋黄鸡的遗传改良提供科学依据和技术支持。
CEBPA（CCAAT/增强子结合蛋白α）是一种转录因子，它在多种细胞类型中起着重要的调控作用，参与了细胞分化、生长和代谢等多种生物学过程。在人类中，CEBPA基因突变与多种疾病有关，包括某些类型的白血病。因此，了解CEBPA在如皋